五指山小型猪近交系主动脉内皮细胞体外培养模型的-中国农业科学.PDF

中国农业科学 2012,45(2):346-352 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.02.017 五指山小型猪近交系主动脉内皮细胞体外培养模型的 建立和TLR2 介导炎症相关因子的表达 1,2 3 2 3 1 2 2 王 攀 , 陶晓莉 , 沈祖楠 , 李和刚 , 潘 杰 , 牟玉莲 , 李 奎 1 2 3 （山东师范大学生命科学学院，济南 250014 ； 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193； 华中农业大学动物医学院，武汉 430070 ） 摘要： 【目的】探讨五指山小型猪近交系主动脉内皮细胞体外分离培养和鉴定的方法，研究LPS 对内皮细胞 TLR2 表达的影响及TLR2 介导内皮细胞炎症因子的表达情况。【方法】以3—4 月龄的五指山小型猪近交系为试验 材料，取其胸腹主动脉，采用0.1%I 型胶原酶消化分离主动脉内皮细胞。利用细胞吸收DiI-Ac-LDL 试验和流式细 胞仪检测CD31 的特异表达两种方法进行内皮细胞的鉴定。1 μg·mL-1LPS 刺激内皮细胞0、6、8 和 12 h，实时荧 光定量PCR 检测TLR2 和TLR4 的表达量；1 μg·mL-1 -1 LPS 刺激内皮细胞12 h 后，10 μg·mL LTA 孵育0、6 和12 h， 实时荧光定量PCR 检测炎症因子 IL-6、IL-8 和黏附分子ICAM-1 的表达量。【结果】分离得到的主动脉内皮细胞 呈铺路石样整齐排列，且生长状态良好；细胞膜上表达CD31 分子和Ac-LDL 的受体，证实分离得到的细胞是血管 内皮细胞。LPS 刺激后细胞TLR2 mRNA 水平的表达量明显升高（P＜0.05），而TLR4 mRNA 水平表达量无明显变化。 添加LTA 孵育后，细胞炎症因子IL-6、IL-8 和黏附分子ICAM-1 的mRNA 水平表达量较对照明显升高（P＜0.05）。 【结论】成功建立了五指山小型猪近交系主动脉内皮细胞体外培养模型，并检测到TLR2 在LPS 刺激内皮细胞后表 达量升高，能够介导细胞炎症相关因子的表达。 关键词：五指山小型猪近交系; 主动脉内皮细胞; TLR2 Establishment of Aortic Endothelial Cells Model in Vitro from Wuzhishan of Inbred Miniature Pig and Expression of Inflammatory Cytokines Mediated by TLR2 1,2 3 2 3 1 2 2 WANG Pan , TAO Xiao-li , SHEN Zu-nan , LI He-gang , PAN Jie , MU Yu-lian , LI Kui 1 2 ( College of Life Science, Shandong Normal University, Ji ’nan 250014; Institute of Beijing Animal Science and veterin