团头鲂病原嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验-水产科学.PDF

第31卷第10期 水 产 科 学 Vol-31No．10 2012年10』3 FISHERIESSCIENCE oct．2012 团头鲂病原嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验 夏 飞1’2，梁利国2，谢骏2 (1．南京农业大学无锡渔业学院，江苏无锡214081；2．中国水产科学研究院淡水渔业 研究中心，农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室，江苏无锡214081) 摘 要：从患病的团头鲂肝脏中分离到1株优势菌wJ一8。将菌株wJ一8进行人工回归感染试验，其患 病症状同自然发病症状，证明其对团头鲂有致病性。该菌株的形态特征、主要理化特性、16SrRNA序 列测定结果及系统发育树的构建表明该菌株为嗜水气单胞菌。药敏试验结果显示，该菌株对氟苯尼 考、甲哌利福霉素、链霉素、卡那霉素等22种药物敏感，对青霉素、氨苄西林、羧苄青霉素、苯唑西林等 12种药物表现出耐药性。 关键词：团头鲂；嗜水气单胞菌；药敏试验 中图分类号：$965．119 文献标识码：A 文章编号：1003—1111(2012)10—0606—05 团头鲂(Megalobramaamblycephala)，俗称鳊菌分离培养，培养温度同养殖池水温30。C。待菌 鱼，是我国特有的经济鱼类，原产于长江中下游的 落长出后，挑选优势菌株进一步纯化。 一些大、中型湖泊中。团头鲂食性广、生长快、易捕 1．2病原菌人工感染试验 捞、品质好，已成为我国广泛引种的优良草食性养 挑取LB固体培养基上的单个菌落接种于LB 殖鱼类。近年来随着集约化养殖程度的提高，团头 液体培养基中，摇床160r／min、30。C培养18h，将 鲂遭受各种传染性疾病的危害也越来越严重，成为 ×106、3×10 制约团头鲂集约化养殖的主要因素[1]。 5、3×104cfu／mL。选择体表无伤痕、 2011年8月，江苏省常州市某水产养殖场养殖活力强、质量约150g的团头鲂用作试验鱼。每个 的团头鲂发病情况严重，病情持续两个多月，养殖 水族箱放养10尾，充气饲养，日换水1次，早、晚各 场池塘几乎都出现病死鱼，发病高峰期每口池塘日 投喂1次配合饲料。试验鱼经过预备饲养7d后， 死亡量多达300尾。病鱼主要症状为体表出血，包 采用肌肉注射的方式进行人工感染，按每尾0．5 括胸部、腹鳍基部、尾鳍基部、下颌、眼眶周缘、鳃盖 mL活菌液注射。每日定时投饵和换水并做好死亡 边缘；解剖可见肠道无食物，肝脏肿大，部分病鱼体 记录，再按照1．1的试验方法，进行细菌分离。以 腔内有黄色黏液、胆囊肿大。由自然发病的团头鲂 引起试验团头鲂发病死亡并能重新分离回收到原 肝脏内分离到一株优势生长菌，经人工回归感染试 感染菌作为分离菌致病性的判定标准。 验，证实该菌株具有较强致病力，通过形态特征、主 1．3生理生化试验 要理化特性及系统发育学等的研究，对该菌进行鉴 将分离菌株WJ一8按照文献口伽中的方法进行 定，同时对病原菌进行药物敏感性试验，旨在为该 生理生化试验。细菌生化微量反应管购自杭州天 菌的有效检验及进一步的研究提供科学依据。 和微生物试剂有限公司。 1．4 16S rRNA基因序列测定与系统发育分析 1材料与方法 1．4．1PCR模板DNA的制备 1．1细菌菌株的分离纯化 将菌株wJ一8