《动物细胞工程》幻灯片.pptVIP

主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 1.其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？ 知识回顾：1.什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 2.B淋巴细胞与抗体的关系： ①B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 ②动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 ③每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 3.传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ 怎样解决这个问题？ 将抗原反复注射到动物体内，然后从动物 血清中分离 4.缺陷： 产量低，特异性差，纯度低 5.解决方法： 采用单个B淋巴细胞进行无性 繁殖，形成细胞群，产生化学性质单一， 特异性强的抗体。 ①思路：⑴要获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群 ⑵将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 ②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因： ⑴一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体 ⑵B淋巴细胞不能无限增殖，而小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖。 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 过程总结： 1.B细胞实际上是 2.单克隆抗体的制备过程经过几次筛选？其目的是什么？ 浆细胞 两次； 第一次筛选的目的是：获得杂交瘤细胞； 第二次筛选的目的是：获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 成为入党积极分子已经快要一年了，在这期间，我始终以党员的标准要求自己。在组织的关怀和党员的帮助下，我在思想上和实践上都取得了明显的进步 动物细胞工程常用的技术手段： 动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 提问： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养, 植物体细胞杂交 动物细胞培养和核移植技术 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 1、选材： 动物胚胎或幼龄动物 的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 2.如何分散成单个细胞？ 一般选取胚胎或幼龄动物的组织细胞的原因是 ①代谢旺盛②增殖能力强③分化程度低 4.过程： 幼龄动物组织 剪碎组织 用胰蛋白酶处理分散成单个细胞 转入培养液中进行原代培养 用胰蛋白酶处理分散成单个细胞 转入培养液中进行原代培养 贴满甁壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液 分甁进行传代培养 动物细胞生长特性： 细胞贴壁： 将动物细胞在液体培养基中培养，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 注意：癌细胞失去了接触抑制 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 5.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 基本概念 1、原代培养：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养 2、传代培养：原代培养的细胞出现接触后，贴满甁壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分甁继续培养，让细胞增殖，称为传代培养。 3、细胞株：原代培养的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大多数细胞衰老死亡，少数细胞存活到40—到50代，这种传代细胞为细胞株。 4、细胞系：细胞株传至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下无限增殖，这种传代细胞称为细胞系。 问题：为什么在培养液中要使细胞分散开来？ 1、培养时接触抑制 2、每个细胞与培养液充分接触，吸收营养 总结： 动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （①