固定化金属螯合亲和膜色谱柱制备及纯化锌超氧化物歧化酶的研究.PDF

第 卷第 期 色 谱 !’ ) \5/8!’G58) 年 月 $$$ % V1/$$$ ;TUG++V?AWGFB?X;TW?YFS?ZWFLT[ ] 固定化金属螯合亲和膜色谱柱制备及 纯化铜锌超氧化物歧化酶的研究 ! ! 魏 琪 ， 姚汝华 ， 鲍时翔 （ 华南理工大学生物工程系，广东 广州 ； 中国热带农科院生物技术国家重点实验室，海南 海 口 ） !8 :!$()! 8 :%!!$! 摘要：以大孔纤维素滤纸为基质，通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化 ，装柱后制得固定 ;1 化金属螯合亲和膜色谱柱。对 ／ 粗品进行了纯化研究，将其比活从 ／ 提高到 ／ ，纯 ;1=2#?@ ():A ,B (’’A ,B 化倍数为 ，蛋白回收率为 ，活性 回收率达 。设计 了一种解决金属离子泄露 问题 的方案，将 !$C% C*D ’:D 泄露量降至 ／ 。 ;1 ’( 3B 关键词：亲和色谱；亲和膜；固定化金属螯合亲和色谱；超氧化物歧化酶 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） ?(:%8%E:: F !$$$#’%!*$$$$)#$*(!#$* 柱由中科院大连化物所惠赠，纤维素分析滤纸购 自 ! 前言 杭州新华造纸厂，超氧化物歧化酶购 自鞍山康美生 固定化金属螯合亲和色谱是一种有效的蛋白质 物制品厂，其它试剂均为国产分析纯化学试剂。 分离纯化方法，其原理是通过 ， ， ， # 实验方法 ;1 ;5 =2 等过渡金属离子与蛋 白质表面的组氨酸、色氨 ##! 亲和膜色谱柱的制备 固定化金属螯合亲 G. 酸或半胱氨酸配位结合，利用蛋 白质表面这些氨基 和膜的制备方法参见文献［ ］。将 张纤维素分 !$ *$ 酸的种类、数量、位置和空间构象的不同所导致的与 析滤纸放入 ／ 氢氧化钠溶液中，经碱处理 :,5/B *$ 金属螯合物的亲和力大小的不同，选择性地对蛋 白 后，再加入 ／ 氢氧化钠 二 甲亚砜 ,.2 $,B:,5/B