天蓝色链霉菌代谢物组测定方法优化及其代谢特征-微生物学报-中国.PDFVIP

554 生 物 工 程 学 报 李宜鸿 等/天蓝色链霉菌代谢物组测定方法优化及其代谢特征 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn April 25, 2014, 30(4): 554−568 DOI: 10.13345/j.cjb.130468 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 1* 2* 2 2 1 2 李宜鸿 ，李珊珊 ，艾国民 ，王为善 ，张部昌 ，杨克迁 1 230601 2 100101 , , , . . , 2014, 30(4): 554−568. Li YH, Li SS, Ai GM, et al. Optimized sample preparation for metabolome studies on Streptomyces coelicolor . Chin J Biotech, 2014, 30(4): 554−568. 摘 要: 链霉菌能够产生多种抗生素，具有重要的研究与应用价值。代谢物组学能够定性和定量测定胞内外主 要低分子量代谢产物。相对于其他组学，代谢物组学在监控胞内代谢状态、指导物种理性改造方面具有独特优 势。本文旨在建立一种快速、准确的链霉菌胞内代谢物分析方法。以模式菌株天蓝色链霉菌为研究对象，基于 GC-MS 分析平台优化了代谢物组学样品制备流程中的细胞淬灭时间、菌体分离方法、代谢物提取及代谢物衍 生化条件，并利用该方法对天蓝色链霉菌不同生长时期各代谢途径的相对活性进行了初步分析。采用“低温淬 灭 (–40 ℃，4 min) -快速过滤分离-反复冻融 (45 s/3 min) -衍生化 (40 ℃，90 min)”的流程能够鉴定出中心 代谢途径 (糖酵解、戊糖磷酸途径和TCA 循环) 、氨基酸代谢途径、脂肪酸代谢途径、核酸代谢途径及部分次 级代谢途径中的 103 种主要代谢物。利用该流程测定发现天蓝色链霉菌细胞生长周期中存在显著的代谢时序差 异，并且发现氨基酸与脂肪酸代谢在衔接初级代谢与次级代谢生物合成中具有重要作用。本研究建立的测定方 法能够有效地用于天蓝色链霉胞内代谢物分析，该方法将有助于深入刻画链霉菌细胞代谢过程，为菌株代谢工 程改造增加次级代谢产物产量提供理性指导。 : 代谢物组，天蓝色链霉菌，初级代谢，次级代谢 Received: September 9, 2013; Accepted: November 12, 2013 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No., National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2013CB734000). Corresponding author: Keqian Yang. Tel/Fax: +86-10 E-mail: yangkq@ Buchang Zhang. Tel/Fax: +86-551 E-mail: zhbc@ * These authors contributed equally to this study. (No. (973 ) (No. 2013CB734000)