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1、打开后的界面如图。
2、点FILENEW—DNASEQUENCE如图
3、输入目的基因片段，可以复制后用ctrl+V键拷贝到栏内，后应加数个N 以备后续设计时
加酶切位点及保护碱基，如图所示。
输入目的基因片段，可以复制后用ctrl+V键拷贝到栏内，后应加数个N 以备后续设计时加
酶切位点及保护碱基，如图所示。
4、此主题相关图片如下：选中enzyme 图标，将所选质粒上的多克隆酶切位点加入左栏 此
主题相关图片如下：选中OK键，
5、分析目的基因中所含的酶切位点，选插入位点时就应排除这些酶 此主题相关图片如下：
6、选中primer 图标，点S图标，editprimer,开始设计正义链。此主题相关图片如下：
7、软件默认引物为二五个碱基 此主题相关图片如下
8、可将鼠标点在设计框的3端从右向左删除7－9个碱基，保留1 －18个配对即可 此主
题相关图片如下：
9、在引物的5端加入选好的酶切位点并在其左侧加3个保护碱基，入该图加入HINDIII
酶切位点及TTA保护碱基，完成后点analyze，认为可以后点OK。此主题相关图片如下：
10、选中左上角A 图标，用鼠标拉动滑块将待选引物放至目的基因末端。
11、从3端删除7－9个碱基同正义链。此主题相关图片如下：
12、将酶切位点加在5端，应将产品目录所示的酶切位点序列从右至左加入（注意不要加
反）如图加入BamHI酶切位点及CGC3个保护碱基。完成后点analyze，认为可以后点OK。
此主题相关图片如下：
13、最后分析结果如图，反义链的FALSEPRIMING可以不考虑，RATING表示引物评分也
可以不考虑，主要看Tm值正义链和反义链相差不应超过3度。GC含量不应超过60％此主
题相关图片如下：
14、该软件有个缺点，不能保存分析结果，只能选择打印 此主题相关图片如下：
15、如果设计RT-PCR检测的引物就如下所示，同上输入目的基因片段，选SEARCH 图标，
选择参数，一般选PCRprimersboth—100至250个碱基，引物长短20＋/-2，searchparametere
中的参数可以不选，为默认设置。点OK。 此主题相关图片如下：
16、显示满足设计参数的候选结果，点OK.此主题相关图片如下：
17、点SENE 选择正义链，RATING表示引物评分，最好选评分高的。此主题相关图片如
下：
18、点ANTI-SENSE,相同方式选择反义链。整个一队引物评价同目的基因克隆的引物设计
相同 此主题相关图片如下：
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