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第十五章 免疫细胞功能检测技术 免疫细胞是指参与机体免疫应答的细胞，大致可分为两类，一类能识别特异性抗原，一旦被激活则显 示出特异性应答的功能， 主要指淋巴细胞群， 包括 T 细胞、 B 细胞、 NK细胞、 K 细胞等； 另一类能捕获抗原， 处理抗原，以一定方式提呈给淋巴细胞或表现其他免疫功能，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等。 测定这些细胞功能可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。 第一节 淋巴细胞的功能检测 淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。 体内试验主要是进行迟发型超敏反应，借此间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反 应； 体外试验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产 物的测定。 一、 T 细胞功能检测 T 细胞具有多种免疫生物学功能，如直接杀伤靶细胞、辅助或抑制 B 细胞产生抗体，对特异性抗原或丝 裂原刺激产生增殖反应及产生各种细胞因子。据此，建立了一系列检测 T 细胞功能的体内和体外试验。 （一）T 细胞增殖试验 1. 原理： T 细胞在体外受到有丝分裂原或抗原的刺激后，细胞增殖，并转化为淋巴母细胞。因此，淋巴 细胞增殖反应又称淋巴母细胞转化。 2. 刺激物： 植物血凝素（ PHA）、刀豆素 A （ConA）和美洲商陆（ PWM）、 白喉类毒素、破伤风类毒素、 纯化蛋白衍生物（ PPD）和白色念珠菌等。 3. 方法学：检测 T 细胞增殖反应的方法有： （1）形态学检查法： 运用普通光学显微镜，简便易行。缺点是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易 受主观因素影响，重复性和准确性较差。 3 （2） H-TdR 掺入法：敏感性高 ，客观性强，重复性好，但需一定设备条件，及存在放射性核素污染问 题。 3 （3）MTT比色法 ：本方法的敏感性虽不及 H-TdR掺入法，但操作简便，无放射性污染。 较常采用。 （二）T 细胞分泌功能测定 体外培养的 T 细胞经各种丝裂原或抗原刺激后，分泌各种细胞因子，可借助免疫学、细胞生物学及分 子生物学技术通过对于 T 细胞分泌细胞因子的含量、生物学活性和基因表达水平，以反映 T 细胞功能。 （三）T 细胞介导的细胞毒试验 常选用可传代的已建株的人肿瘤细胞，与待检淋巴细胞混合，观察肿瘤细胞杀伤的情况。 是评价机体 细胞免疫水平的常用指标，特别是测定肿瘤患者 CTL杀伤肿瘤细胞的能力，常作为判断预后和观察疗效的 指标之一。 （四）体内实验 正常机体对某种特殊抗原建立了细胞免疫后，如用相同的抗原做皮肤试验，常可出现阳性的迟发型超 敏反应。目前临床上常用于诊断某些病原微生物感染（结核、麻风等）和细胞免疫缺陷等疾病，也常用于 观察细胞免疫功能在治疗过程中的变化及判断预后等。 1. 特异性抗原皮肤试验：常用的特异性抗原皮肤试验为结核菌素皮肤试验。 其他皮试抗原还有白色念 珠菌素、皮肤毛癣菌素、腮腺炎病毒等。受试者对所试抗原过去的致敏情况直接影响试验结果。若受试者 从未接触过该抗原，则不会出现阳性反应，因此阴性者也不一定表明细胞免疫功能低下。为避免判断错误， 往往需用两种以上抗原进行皮试，综合判断结果。 2. PHA皮肤试验 ：将定量 PHA注射到受试者前臂皮内， 可非特异性刺激 T 细胞发生母细胞转化， 呈现以 最新各类医学考试课程联系 Q 单个核细胞浸润为主的炎性反应。 PHA皮肤试验敏感性高， 比较安全可靠， 临床常用于检测机体的细胞免疫 水平。 二、 B 细胞功能检测 B 细胞主要产生 Ig 参与机体体液免疫应答， B 细胞功能低下或缺乏者对外源性抗原刺激的应答能力减 弱或缺陷，特异性抗体产生减少或缺如。因此，