逆境胁迫对植物生理生化指标的影响.docVIP

PAGE 1 本科学生综合性实验报告 学号 084120423 姓名 罗 双 洪 学院 生 科 专业、班级 08生技 实验课程名称 植物生理学实验 教师及职称 李 忠 光 开课学期 2010 至 2011 学年 下 学期 填报时间 2011 年 6 月 15 日 云南师范大学教务处编印 一．实验设计方案 实验序号 九 实验名称 逆境胁迫对植物生理生化指标的影响 实验时间 2011.5 实验室 430 实验目的 （1）掌握逆境胁迫下一些植物生理指标测定方法； （2）了解脯氨酸（丙二醛、）的积累 （3）了解逆境胁迫下植物生理生化指标的变化以及逆境伤害和适应的原因。 2.实验原理、实验流程或装置示意图 1.逆境胁迫与Pro的积累 （1）植物在遇到干旱、高温、低温、盐渍等逆境胁迫情况下，植物体内通过①蛋白质的降解、②从头合成和③降低脯氨酸脱氢酶活性等途径合成脯氨酸（Proline, Pro）,从而提高了植物对逆境的抵抗能力。 （2）在酸性条件下与茚三酮发生反应生成红色化合物，此化合物在520 nm处有最高吸收峰。 2.逆境胁迫与丙二醛的积累 丙二醛（MDA）是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。 3逆境胁迫与的积累 （1）植物在遇到干旱、高温、低温、盐渍等逆境胁迫或衰老的情况下，植物体内以为代表的活性氧（reactive oxygen species, ROS）大量积累,作为胁迫信号或适应信号启动一系列死亡或适应生理过程。 （2）在酸性条件下（pH=1.6），将Fe2+氧化为Fe3+ ， Fe3+进一步与二甲酚橙反应形成紫色的复合物Fe3+ -XO，此复合物的最大波长为560 nm，在一定范围内，其颜色深浅与含量呈线性关系。在此反应中加入山梨醇可提高测定的灵敏度。 4实验的一般流程：选取材料→提取目标物质→测定→计算→比较 3.实验设备及材料 试剂：PBS(提取液)，3%磺基水杨酸（SSA）, 冰乙酸, 茚三酮， 0.5%TCA， 0.6%TBA，50mM PBS (pH=6.8，内含1mM HA)，5%，20% ，石英砂等。 仪器：研钵，移液枪，分光光度计，离心机等。 实验材料：正常条件下的玉米幼苗，干旱条件下的玉米幼苗。 实验方法步骤及注意事项 1.试验方法步骤： (1)逆境胁迫与Pro的积累 ①Pro的提取：分别取0.5 g实验组和对照组的胚芽鞘→加入3 ml 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2 ml 3% SSA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml。 ②测定：上清液各2 ml →分别加入2 ml冰乙酸和2 ml茚三酮试剂→煮沸15 min→冷却后分别测定 ③计算： Pro content = (mmol.g-1FW) （2）逆境胁迫与丙二醛(MDA)的积累 ①MDA提取：分别取0.5 g实验组和对照组→加入3 ml 50mM PBS (pH=7.8)或0.5%TCA和少许石英砂→充分研磨→用2 ml PBS或0.5%TCA洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml。 测定：分别取上清液各2 ml →加入0.6%TBA（用0.6% TCA配制） 2 ml→煮沸12 min→冷却→ 5000 rpm离心10 min →分别测定和 ③计算：×85.4 =×7.4+155000× 求解方程得/(mmol/L)=11.71 /(μmol/L)=6.45-0.56 式中，为可溶性糖的浓度；为MDA的浓度 （3）逆境胁迫与的积累 ①提取：分别取0.5 g实验组和对照组→加入3 ml 50mM PBS (pH=6.8，内含1mM HA)和少许石英砂→充分研磨→用2 ml PBS洗研钵→5000 rpm离心10 min →上清液定容至5 ml。 ②测定：分别取上清液各2 ml→加入2 ml 5%[用20%(v/v) 配制，空白调零用20% 取代] →反应10 min→5000 rpm离心10 min → 测定OD410 ③计算： content = /ε.L.W ×× (mmol.g-1FW) 2.试验注意事项：