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载体的定义?
载体:指携带外源基因进入受体细胞的运载工具,它的本质是DNA复制子。
载体必须具备的3个基本条件?载体的碱基对越多越好?
基本条件:1具有复制子,能在宿主细胞内自主复制,并携带重组DNA分子一同扩增;
2具有单一限制性内切酶的酶切位点或多克隆位点;
3有合适的选择标记基因,用来筛选重 组DNA。
载体的碱基对越少越好,否则容易错配.
目前研究最深,使用最多的载体有?
目前研究最深、使用最多的载体是经过改造的质粒载体和噬菌体载体。
按功能分,有哪些载体?克隆载体的概念?表达载体的概念?
(1)按功能分,可分为克隆载体、表达载体、测序载体、转化载体、穿梭载体、多功能载体等。(2)克隆载体:携带插入外源片段的质粒或噬菌体,从而产生更多物质或蛋白质的产物。(3)表达载体:在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、PBS、终止子),使目的基因能够表达的载体。
选择标记有哪些?插入失活、a-互补是什么意思?
(1)选择标记有插入失活和a-互补(2)插入失活:若把外源DNA片段插入到载体的选择标记基因中而使基因失活,丧失其原有的表性特征。(3)a-互补:单独存在的a及w片段均无β半乳糖苷酶活性,只有宿主细胞与克隆载体同时共表达两片段时,宿主细胞内才有β半乳糖苷酶活性,使特异性作用物变为蓝色化合物。
列举常用的质粒载体名称?
PBR322质粒、PUC载体、TA克隆载体
噬菌体的溶原状态是指?
噬菌体感染大肠杆菌时,可能进入一个溶菌循环,结果导致细胞的裂解,释放出噬菌体颗 粒;或者进入与宿主不同程度的稳定状态。
噬菌体DNA由哪三个部分组成?目的基因插入哪个部分?
(1)噬菌体DNA由左臂、中臂、右臂三部分组成。(2)目的基因插入中臂(非必须区)部分。
超级载体的特点?有哪些超级载体?
1)超级载体的特点:运载量大(2)超级载体:YACs、BACs
表达载体与克隆载体有什么最大的区别?
表达载体有强大的启动子和SD序列,而克隆载体没有
限制性内切酶
限制性内切酶:能识别DNA分子上的特定位点并将双链DNA切断的酶
DNA连接酶,T4连接酶
DNA连接酶:一种能够在两条DNA链之间催化5’-P和3’-OH形成磷酸二酯键的酶
T 4连接酶:连接黏性末端或平末端的酶
DNA聚合酶,Taq聚合酶
DNA聚合酶:催化脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)聚合成DNA的酶
Taq聚合酶:从嗜热水生菌中分离纯化出来的
逆转录酶
逆转录酶:又称依赖于RNA的DNA聚合酶,是分子生物学中最重要的核酸酶之一。
核酸酶,DNase,Rnase
核酸酶:通过切割相邻两个核糖酸残基之间的磷酸二酯键,从而导致核酸分子发生水解断裂的蛋白酶
DNase:即脱氧核糖核酸酶,特异水解断裂DNA分子的酶
RNase:即核糖核酸酶,专门水解断裂RNA分子的酶
碱性磷酸酶,细菌性/小牛肠碱性磷酸酶
碱性磷酸酶:有两种不同来源的碱性磷酸酶:一种是从大肠杆菌中纯化出来的,叫做细菌碱性磷酸酶;一种是从小牛肠中纯化出来的,叫做小牛肠碱性磷酸酶。它们能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。
细菌碱性磷酸酶:一种是从大肠杆菌中纯化出来的,叫做细菌碱性磷酸酶
小牛肠碱性磷酸酶:一种是从小牛肠中纯化出来的,叫做小牛肠碱性磷酸酶
DNA与基因的区别?
基因是有遗传功能的DNA片段
DNA的链是通过什么方式连接的?两条DNA单链是通过什么键连接在一起的?
(1)磷酸二酯键;(2)氢键
DNA中四种碱基对的名称?
A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、T(胸腺嘧啶)
DNA和RNA的区别?
(1)DNA是脱氧核糖核酸;RNA是核糖核酸;(2)这两种核糖的区别在于脱氧核糖2’-碳原子上的羟基被脱了氧,只剩下H,这个区别使得DNA比RNA更具有化学稳定性
遗传信息是如何表达(翻译、传递)的?
P18
mRNA,tRNA,rRNA的功能分别是什么?
mRNA功能:信使
tRNA功能:转运
rRNA功能:核糖体RNA存储
基因突变有哪几种类型?
染色体畸变(1.染色体结构变异2.染色体数目变异),点突变-----基因突变(错义突变、同义突变、无义突变)
操纵子的概念?
概念:在细菌中,一组基因受一个启动子控制,被转录成一个长的RNA分子,这样的一组基因成为操纵子。
简述乳糖操纵子的作用机理?
P471、无乳糖时,调节基因lacI?编码阻遏蛋白,与操纵基因O?结合后抑制结构基因转录,不产生代谢乳糖的酶,使结构基因不表达。
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