细胞免疫荧光操作步骤直接法A.所需溶液和试剂.pdfVIP

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2019-07-03 发布于未知
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北京博奥森生物技术有限公司 BEIJING BIOSYNTHESIS BIOTECHNOLOGY CO. LTD. ， Tel：010 Fax：010 Web： E-mail：bioss@ 细胞免疫荧光操作步骤—直接法 A. 所需溶液和试剂 1. 磷酸盐缓冲液 (C01-01001)：0.1M 1XPBS （PH7.4） 2. 固定液：4%多聚甲醛溶液（无甲醇）(C01-06002) 3. 抗体稀释液(C-0007)：1%BSA,0.03%Proclin300 的0.1MPBS 4. 0.3%细胞穿膜剂（C03-03002）：0.3%TritonX-100 5. 封闭用正常山羊血清（原液）（C-0005） 6. DAPI 染液（C02-04002） B ．操作步骤 1.弃去细胞培养液，PBS洗3次，5min/次。 2.固定：4%多聚甲醛室温固定20min，也可4℃固定过夜。 3.PBS洗3次，5min/次。 4.透膜：0.3%Triton X -100 （C03-03002）室温作用20min （如检测的蛋白为细胞膜蛋白，可省略此步）。 5.PBS洗3次，5min/次。 6.封闭：1:20稀释山羊血清（二抗来源血清）室温封闭20min。 7.PBS洗3次，3min/次。 8.一抗 1:200稀释，37℃下作用1.5h （孵育抗体的浓度，作用时间通过预实验决定）。 9.PBS洗3次，10min/次。北京博奥森生物技术有限公司 BEIJING BIOSYNTHESIS BIOTECHNOLOGY CO. LTD. ， Tel：010 Fax：010 Web： E-mail：bioss@ 10.DAPI 复染细胞核，1:1000稀释，室温作用5min。 11.PBS洗3次，5min/次。 12.取出细胞爬片置于载玻片上，镜下观察。