水稻纹枯病遗传的丰富多样性的研究进展.pptVIP

染色体的数量，形态，着丝点的位置。 * 同工酶是指生物体内催化相同反应而分子结构及理化性质不同的一组酶。同工酶分析技术是通过电泳和组织化学方法进行特异性染色分离出同工酶，并将其位置和活性直接以酶谱的形式表现于染色区带上。 同工酶变异丰富、酶带间差异表现在同一基因位点的等位基因的差异，能稳定遗传，不受生物性状表现的影响，是研究生物遗传多样性中较为可靠的遗传标记。 * * 原理：利用特定的限制性内切酶识别并切割不同生物个体的基因组DNA，得到大小不等的DNA片段，通过凝胶电泳分析这些片段，就形成不同带，然后将DNA进行变形，变性后的单链DNA粘附在尼龙膜或亚硝酸膜上，再与克隆DNA探针进行Southern杂交和放射显影，即获得反映个体特异性的RFLP图谱。 缺点：RFLP分析对样品纯度要求较高，样品用量大，且RFLP多态信息含量低，多态性水平过分依赖于限制性内切酶的种类和数量，加之RFLP分析技术步骤繁琐、工作量大、成本较高，所以其应用受到了一定的限制。 * 国内外有很多学者使用随机片段长度多态性方法对水稻纹枯病多样性进行研究，这里就只举几个例子。 * 1990 分子植物病理学杂志 用随机片段长度多态性的方法分析来自不同融合群的立枯丝核菌，用EcoR I进行酶切的 * Bam HI HpaII * 无需专门设计RAPD扩增反应的引物，也无需预知被研究的生物基因组核苷酸顺序，引物是随机合成或是任意选定的。 每个RAPD反应中，仅加单个引物，通过引物和模板DNA链随机配对实现扩增，扩增没有特异性 但是RAPD也存在一些难以克服的缺点，如：RAPD是共显性标记不经过后代测试无法区分杂合子和纯合子。对单倍体真菌不成问题，但对许多异核体，双倍体及多倍体的担子菌和卵菌则是一个难题。 * 2010 韩国 植物病理学杂志 随记扩增多态性 随记引物分别为 PELF 与URR * AFLP标记是RFLP和RAPD相结合的一种产物，所需DNA量少，不需Southern杂交，实验结果稳定可靠，重复性、多态性强，同时结合了RFLP和RAPD的优点. * 不过，AFLP需要用同位素检测，费用昂贵，对操作人员素质及DNA质量要求较高。 * 黑龙江省水稻纹枯病菌的遗传距离变化在0.50～0.92之间，平均为0.71，群体遗传多样性较为丰富。UPGMA法可以将供试菌株分成4个AFLP聚类组群(I、Ⅱ、III和Ⅳ)，相同地理来源的菌株基本上聚集在同一组群内，表明AFLP类群划分与菌株的地理来源有较强的相关性。 * 简单重复序列 SSR也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1-6bp，其中最常见的是双核苷酸重复，即((CA)n和((TG)n，每个微卫星DNA的核心序列结构相同，重复单位数目10-60个，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。SSR标记的原理是根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物。 * 常用的DNA分子标记方法 1. 限制性片段长度多态性(RFLP) * Jabaji-Hare（1994）等首先采用核内核糖体DNA（rDNA）对丝核菌融合群体进行限制性片段长度多态性RFLP分析，虽然两个实验都发现了每个融合群都有一个或多个特征谱带，但在同一融合群内的特征谱带数目不一致。 Rosewich（1999）以7个单拷贝探针与美国德克萨斯州的6个稻米产区的182个纹枯病菌分离物进行RFLP分析，结果表明，6个地区的立枯丝核菌AG1-IA融合群均表现出多态性。 Vilgalys（1990）等的实验则指出由于AG1和AG2融合群的各亚群因表现相当大的遗传变异性，难以按RFLP带型划分。 RFLP法纹枯病菌遗传多样性国内外研究进展 * RFLP * PCR-RFLP * 常用的DNA分子标记方法 2. 随机扩增多态性(RAPD) 原理：它是利用随机引物（一般为8-10bp）通过PCR反应非定点扩增DNA片段，然后用凝胶电泳分析扩增产物DNA片段的多态性。RAPD所使用的引物各不相同，但对任一特定引物，它在基因组DNA序列上有其特定的结合位点，一旦基因组在这些区域发生DAN片段插人、缺失或碱基突变，就可能导致这些特定结合位点的分布发生变化，从而导致扩增产物数量和大小发生改变，表现出多态性。 * RAPD法纹枯病菌遗传多样性国内外研究进展 Duncan（1993）等采用RAPD分子标记技术，对来自澳大利业不同融合群(AG) 菌株进行遗传多样性分析，发现生成的指纹图谱能将所有的AG群区分开，但不同地理来源的菌株之间则无区别规律，这表明RAPD-PCR是可用于丝核菌融合群间区分的。 周而勋（2002）等对来自我国南方6个省