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石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明
学位论文独创性声明
本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除 文中已经注明引用的内容外 ,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确的说明并表示谢意。
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使用授权声明
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日
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日
本 研 究 是 由 科 技 部 国 际 科 技 合 作 项 目
(NO.DF2007DFB30420)《绵羊非繁殖季节
产羔性状的 QTL 定位及相关基因的分离》资助完 成。
I
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摘 要
绵羊是季节性繁殖的动物,不能常年发情。怎样改变绵羊的这种季节性发情状态, 使其达到常年发情是现在以及未来的研究重点。绵羊的季节性包括非繁殖季节和繁殖季 节,对繁殖季节发情的了解已经相对清楚,但对非繁殖季节的研究还不是很深入,虽然 前人进行了大量的实验,新疆的绵羊始终维持季节性发情的现状。针对非繁殖季节绵羊 不发情的问题,恰恰是对这个时期绵羊表现认识的不够。包括外界环境因素,和内部相 关激素的分泌和相关基因表达调控。外界环境方面影响的研究已经有人在做,我们关注 的焦点是绵羊在非繁殖季节体内的激素分泌和基因表达变化。希望通过此实验找到限定 绵羊发情的主要调节激素、主要调控基因。本研究通过 ELISA 检测了非繁殖季节和繁 殖季节中绵羊 E2、P4、FSH、LH 四种生殖激素的浓度,获得了与激素水平发情判定相 关的生殖激素,结合卵巢颗粒细胞中不同浓度 17-β雌二醇诱导下的 ERβ、PR、INHBA 的表达分析,找到了三个基因的表达差异。最终确定了绵羊发情判定的生殖激素浓度范 围以及调控绵羊非繁殖季节不发情的相关基因。实验过程和相应结果如下:
一:在繁殖季节, E2、P4、LH 的平均浓度跟非繁殖季节的绵羊比起来差异显著
(P0.05)。,FSH 差异不明显(P0.05)。
二:在非繁殖季节,激素处理组和对照组中均出现了发情羊、发情不明显羊、和不 发情羊。说明在非繁殖季节这个大环境,母羊不发情的情况下,公羊试情存在一定缺陷。 通过 ELISA 测定发现,雌激素的有效浓度可以判定绵羊的发情状态。
三:以绵羊卵巢颗粒细胞为实验对象,通过不同浓度的 17-β雌二醇处理细胞,培
养 12-48 小时后,ELISA 测定细胞液中 E2、P4、FSH、LH 的浓度。结果表明:所有细 胞液中未检测出 LH,而 E2、P4、FSH 呈现出一定的分泌规律。
四:通过荧光定量 PCR 测定 ERβ、PR、INHBA 基因在颗粒细胞中的相对表达。 试图找到激素诱导下的 ERβ、PR、INHBA 基因表达规律。结果表明 INHBA 随时间的 延长,浓度逐渐升高,而 ERβ、PR 表达量随时间延长逐渐减少,差异显著(P0.05)。 本研究结果表明,在非繁殖季节,绵羊在雌激素和孕酮分泌上,发情羊普遍低于繁 殖季节不发情羊,与卵巢颗粒细胞中 INHBA 的大量表达有关系。非繁殖季节绵羊的发 情状态也不仅仅局限于发情和不发情、还存在发情不明显的情况。发情状态的多变也为
我们提出了在此基础上进一步细分绵羊的不同发情表现的要求。 关键词:非繁殖季节;颗粒细胞;酶联免疫测定;雌激素;孕酮;促卵泡素;促黄体生 成素
论文研究类型:A(基础研究)
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Abstract
Abstract: Sheep are seasonal breeding animals, and that restricts the rapid and healthy development of sheep production. How to break their seasonal barrier and achieve year-round breeding is the focus of our future study. Sheep’s seasonal include breeding season and non-breeding season. Though hormone secretion and gene expression’s specific mechanism in breeding season is very clear, we are still p
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