噬菌体表面表达随机8肽文库的构建.PDFVIP

( ) 中国病理生理杂志 　Chinese Journal of Pathophysiology 　2000 , 16 3 : 243～246 ·243 · ( ) [文章编号] 　1000 - 4718 2000 03 - 0243 - 04 噬菌体表面表达随机 8 肽文库的构建 1 2 1 1 1 刘革修 , 　王 　华 , 　张 　彤 , 　黄红林 , 　廖端芳 ( 1. 衡阳医学院药理教研室 ,湖南 衡阳 421001 ; 2 . 华西医科大学病理教研室 , 四川 成都 610044) 　　[摘 　要] 　目的:构建噬菌体表面表达随机 8 肽文库 ;方法 :采用人工合成随机寡核苷酸 、基因重组技术 , 噬菌体表面表达技术等 ,构建该文库 ;采用多聚酶链式反应技术 、核酸杂交技术和测序分析评价鉴定 。多聚酶 链式反应所采用的上游引物包括载体克隆位点处部分碱基和部分外源基因的碱基 ;在核酸杂交中设计了噬菌 体载体克隆位点互补探针 , 以更加准确地排除无外源基因插入的克隆;在测序鉴定中 ,选择了 2 个混合探针杂 交阳性的克隆 。结果 : 以上证实获得独特克隆为 21 ×108 ;亲和富集实验证实所建噬菌体文库可以稳定扩展 。 结论 :我们成功地构建了噬菌体随机 8 肽文库 ,其库容量为 21 ×108 。 [主题词] 　噬菌体 ; 　肽类 ; [ 中图分类号] Q782 ;Q343 　　　[文献标识码] A ( Mannheim 公司产品。限制性内切酶 、T4 DNA 连接 　　噬菌体表面表达技术 phage display techniques , PDT) [ 1] 是以改建的噬菌体为载体 ,把外源基因插入 酶 、琼脂糖为 Promega 公司产品 , 多聚酶链式反应 噬菌体外壳蛋白质基因 , 以使表达的外源肽或蛋白 (polymerase chain reaction , PCR) 试剂为上海生物工 质显露在噬菌体的表面 ,并保持其空间构象 ,通过 程公司产品 , 氯仿 、乙醇等均为国产分析纯产品 , 亲和免疫吸附法筛选出特异表达肽或蛋白质的新 DNA 序列分析试剂盒为美国应用生物系统公司产 技术 。目前国外成功地构建了不同大小的肽文库 、 品。 抗体文库 、蛋白质文库 ,并筛选出了比现有活性物 三 、DNA 合成与纯化 质功能更好的新型分子[2～4 ] 。结合该技术开展心 含编码 8 肽DNA 序列为 5CATTCTCACTCGGCC 血管疾病药物筛选研究仍处于起步阶段 ,但是其应 GACGGGGCT (NN K) 8 GGGGCCGCTGGGGCCGAAACT 用前景令人关注 :特异结合抗纤溶酶原激活物抑制 GTTGAA 3,其中N 代表 A 、T 、C 、G 四种碱基 , K 代 [5 ] ( ) 剂 ,组织纤溶酶原激活剂和尿激酶型纤溶酶原激 表 G、T 两种碱基 , NN K 8 为编码随机 8 肽部分 ,划 活剂抑制物的筛选[6 ] , 血小板膜受体的拮抗剂的 线部分为 Bgl I 识别序列 。用于扩增 8 肽随机 DNA 筛选[7 ] ,抑制血小板凝聚的短肽[8 ] 的研究 。上述这 片段引物 :P815CTATTCTCACTCGGCCGACG 3和 P82 些研究其潜在的药物开发价值