干化学尿液分析仪的相关理论基础.docVIP

干化学尿液分析仪的相关理论基础 TOC \o 1-3 \n \h \z \u HYPERLINK \l _Toc297810947 1 干化学分析的理论基础 HYPERLINK \l _Toc297810948 2 尿液分析仪的原理 HYPERLINK \l _Toc297810949 2.1尿干化学试带各项测试原理 HYPERLINK \l _Toc297810950 2.2 尿液分析仪测量原理 HYPERLINK \l _Toc297810951 2.3 尿液分析仪的基本原理及研究现状 干化学尿液分析仪是测定尿中某些化学成分的自动化仪器，它是医学实验室尿液自动化检测的重要工具。这种仪器虽然具有操作简单、快速等优点，但是使用不当，许多应用环节因素可直接影响尿液分析仪的准确性，不合理的应用会带来实验结果的误差，甚至延误诊断。因此，这就要去操作者对自动化仪器的原理、性能、注意事项及影响因素等方面的知识有全面的了解，才能更好的使用自动化仪器，是尿液分析仪得出的结果更可靠、准确。 1 干化学分析的理论基础 当代的干化学技术是多种前沿科学的交融，其测定方法主要是差示电位法和反射光度法两大类。尿液的干化学检验使用的湿反射光度法。 干化学分析所涉及的反射光度法主要为漫反射(diffuse reflection),有其两个特点：①因显色反应发生在固相，其对透射光均有明显的散射作用，因此计算不服从Lambert-Beer定律，而遵循Kubelka-Munk理论;②固相反应膜的上下界之间存在多重内反射。 Kubelka-Munk理论的数学表达式： 表示反射率，表示固相反应层的厚度，表示单位的厚度的光吸收系数，表示固相反应层的散射系数。 其中， ，， 由于K正比于待测物质的浓度C，因此由上述表达式可见，当S和X固定时，反射率R仅与待测物质的浓度有关。换言之，即可由反射光度仪器测得的R值推算出待测物质的浓度C。由于固相层存在着明显的散射作用，因此反射吸收光度A与待测物质浓度C不成线性关系，Kubelka-Munk理论简单用公式表示为： 其中C为待测物浓度，B为吸收比例常数，为反射吸光度，为空白反射度，为空白反射光强度，为测定的反射光强度，非线性校正因子。 由于固相反应层不仅存在着光的散射作用，它的上下界面之间的多重内反射的作用也不容忽视，因此要对Kubelka-Munk理论进行修正，为此可推导出如下的Williams-Clapper公式： 其中代表Williams-Clapper转换函数。 2 尿液分析仪的原理 单项试纸带是干化学发展初期的一种结构形式，它以滤纸为载体，将各种试纸成分浸渍后干燥，作为试纸层，再在其表面覆盖一层纤维素作为反射层。尿液浸入试纸带后，与试剂发生反应，产生颜色变化。 多联试纸带式将多种项目试纸集成在一个试纸带上，使用多联试剂袋，浸入一次尿液可同时测定多个项目，图1为德国宝灵曼公司试纸带。它采用了多层结构：第一层尼龙膜起保护作用，防止大分子 物质对反应的污染；第二层绒制层，它包括碘酸盐层可破坏维生素C等干扰物质，试剂层含有实际成分，主要与尿液所测定物质发生化学变化，产生颜色变化；第三层是固定有试剂的吸水层，可使尿液均匀、快速地浸入，并能抑制尿液流到相邻反应区；最后一层选取尿液不浸润的塑料片作为支持体。 2.1尿干化学试带各项测试原理 （1)ph测定 采用pH指示剂原理，常用甲基红(pH4．6～6．2)和溴麝香草酚蓝(pH6．0～7．6)组成的复合型指示剂，呈色范围为pH4．5～9，颜色由橘黄色、绿色直至蓝色，由此反映尿液的pH。 (2)尿蛋白员测定 利用pH指示剂蛋白质误差的原理。蛋白质膜块中主要含有pH指示剂如溴酚蓝或四氯酚四溴磺酞、柠檬酸缓冲系统和表面活性剂。尿中带阳离子的白蛋白与带阴离子的指示剂结合，引起指示剂进一步电离，从而发生颜色变化，其颜色深浅与尿中白蛋白的含量有关。 (3)尿葡萄糖测定 一般均采用葡萄糖氧化酶法，使尿液中的葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢，在过氧化物酶存在下无色的色原是一供氢体，经脱氢后分子结构发生变化而显色，其颜色变化与尿葡萄糖含量有关?目前各厂使用的色原有两类，一类为邻联甲苯胺(德国宝灵曼公司COMBUR．TEST)，颜色从黄色变为绿色、蓝色；另一类为碘化钾(以美国A1TieS公司为代表的试带)，颜色由蓝色变绿色、棕色。为此，尿液化学分析仪应采用专用的配套试带。 (4)尿酮体测定 用亚硝基铁氰化钠反应测定酮体，即在碱性条件下，尿中的乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠反应而呈色。丙酮反应次之，但不与尿中的B．羟丁酸发生反应。 (5)尿隐血反应 利用破坏红细胞中的血红蛋白、游离血红蛋白及肌红蛋白中的血红素，后者具有类似过氧化物酶的作用，在过氧化氢存在下使色原脱氢氧化，分子构型改变而呈