生化实验《 动物生物化学实验》 基本理论讲授教材编辑.ppt

《动物生物化学实验》基本理论讲授;生物化学基本实验技术;一、离心技术;① 离心力（F）：在一定角速度下作圆周运动的任何物体都受到一个向外的 离心力。 F=ω2r （ω是旋转角速度，以弧度/秒为单位；r是离心转子的半径，以cm为单位 ） ② 相对离心力（RCF）：离心力转化为重力加速度（g）的倍数 。 RCF=ω2r/g=（1.119×10-5）n2r n为转子每分钟的转数（rpm） 一般情况下，低速离心时常以转速“rpm”来表示，高速离心时则以“g” 表示。 ③ 沉降系数（S）：颗粒在单位离心力作用下粒子移动的速度。 S的物理意义是颗粒在离心力作用下从静止状态到达等速运动所经过的时间，单位为秒。 S在实际应用中常在10-13秒左右 ，即10-13s为1S 。文献中常用沉降系数以描述某些生物大分子或亚细胞器大小。;4. 离心管的选用;5. 离心机的使用注意事项;5) 启动离心时转速应由小至大，缓慢升速，达到预定转速后再调整离心时间至预定时间。 6) 在使用过程中，若发现声音不正常，应立即停机。 7) 离心结束，要等到转速为零时才能打开离心机盖，取出样品。调整调速旋钮至零位，同时关闭电源。 8) 每次使用后，要仔细检查转头，及时清洗、擦干。长期不使用，应将转子取下擦拭涂油并妥善保管。 ;二、光谱技术（分光光度技术）;① 光吸收：当一定波长的光通过某介质时，该介质有选择地吸收某一波长的光，使入射光的强度减弱，这种现象称为光吸收。 ② 吸光度（A）（absorbance）： 又称光密度（OD）或消光度（E），表示光被吸收的量度。它与被测溶液的浓度（C），液层的厚度（L）成正比，消光度越高，溶液对光吸收的程度越大。 在做OD值测定时，空白管用于调零。 ③ 透光度（T）（transmittance）——表示光线透过的量度。通常以百分数表示 。 ④ 消光系数（ε）：是溶液对光吸收的比例常数，消光系数的物理意义是吸光物质在单位浓度以及单位厚度时的吸光度值，用ε表示。 ε值取决于溶质性质、入射光波长和温度。ε越大，吸收光的能力越强，相应的分光光度法测定的灵敏度就越高。 ;（1）朗伯－比尔（Lambert—Beer）定律： ① 朗伯定律： 一束单色光通过溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的强度就要减弱,若溶液浓度不变，则溶液的厚度愈大，光的强度减低也愈显著（吸光度或消光度愈大）。 ② 比尔定律：当液层厚度一定时，透过光线的强度（透光度）随溶液浓度的增加成指数函数减少。 ③ 朗伯－比尔（Lambert—Beer）定律 ：光密度（OD）或吸光度（A）与被测溶液的浓度（C），液层的厚度（L）成正比；而透光度（T）的对数则与溶液的浓度（C），液层的厚度（L）成反比，表示为OD= KCL，此关系即为Lambert-Beer定律。式中K为消光系数，C为溶液浓度，L为液层厚度）;① 标准管法： 根据OD1=K×C1×L OD2=K×C2×L 则OD1/OD2=C1/C2 待测定液浓度(C1)=(待测液光密度OD1/标准液光密度OD2)×标准液浓度（C2） 此测定方法要求两者的浓度必须在光度计有效读数范围内(一般在0.1-1.0之间)，同时要求配制的标准溶液的浓度应尽量接近被测定溶液，不然将出现测定误差。 ;② 标准曲线法 在光度计的测定范围内，配制一系列已知不同浓度的标准溶液，在同一光度计中分别测出它们的光密度值(OD)。以测得的OD值（A值）为纵坐标，相应的溶液浓度为横坐标，可作出一光密度与浓度成正比通过原点的直线图。此直线称为标准曲线。 各个未知溶液只要按相同条件(与标准溶液相同)处理，在同一光度计上测得光密度值，即可迅速从标准曲线上查出相应的浓度值。此称为标准曲线法。 在被测同一物质的多个样品、浓度各不相同时，用标准管法测定，需要配制许多标准溶液，十分不方便。标准曲线法在实验反应条件比较恒定，样品数量多的测定中是十分方便准确的。;4.分光光度计种类;5. 分光光度计的组成及测定原理;7200型分光光度计可见的使用方法 ;1. 概念和原理： 又称色谱技术。利用被分离混合物中各组分的物理、化学及生物学特性（主要指吸附能力、溶解度、分子大小、分子带电性质及带电量的多少、分子亲和力等）的差异，当它们通过一个