用荧光双链引物特异扩增并定量核酸-Core.PDF

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41 1 厦门大学学报( 自然科学版) Vol.41 No. 1 2002 1 Journal of Xiamen University ( Natural Science) Jan. 2002 :0438 0479( 2002) 01 0108 04 l, 2 1, 2 1, 2 1, 3 郭秋平 , 李庆阁 栾国彦 , 梁基选 ( 1. ; 2. ; 3. , 361005) : ) ) ) , . 5. , 3. ..PCR , , , , . B . , PCR . : ; : Q 52 :A 1985 Mullis ( PCR) , 3. , PCR , , , . 3. . , , , , . , PCR . PCR , , , , , , , . . 3. PCR ( , TaqMan ) DNA , , , , , , , . , PCR . 1 / 0, PCR , , , B PCR . , PCR B ( Genbank [2] . HuMMB5E) 195~ + 73 , , 5. 278 bp. 5 mL, :2001 02 20 : , ( 1975 ) , , . 1 : # 109 # , , . 1 1 PCR DNA, 30 LL T E , , DNA, 20 e , PCR . D E PCR , .1B1. 5 .1 2 PCR , , 10 mmol/ L T ris HCl, pH 8. 3, 1. 5 , PCR mmol/ L Mg2+ , 94 e 15 min, 55 e , PCR , 30 min. PCR PCR , 50 LL 10 , , mMTris HCl, pH8. 3, 2. 0 ~ 2. 5 mmol/ L MgCl , 50 . 2 mmol/ L KCl, 200 Lmol/ L dNTP(Pharmacia) , 2. 0 U , T aq (Promega) , 0. 4 Lmol/ L ( , , ) , 10 LL DNA, 50 LL . 3. . 94 e 5 min , 94 e 45 s, 55 e 35 s, 72 SYBR Gold DNA . SYBR Gold e 1 min 40 , 72 e 5 min. , DNA PCR Cycler iQTM Real T ime

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