高度近视与基因突变之关系.docVIP

高度近視與基因突變之關係 【前言】 高度近視 (high myopia) 是指大於600度以上的近視，容易併發飛蚊症、閃光幻覺、 玻璃體混濁、黃斑變性、併發性白內障、原發性視網膜脫離、開角型青光眼等。然而目前已知高度近視的成因除了視軸過長、眼壓過高、內分泌因素、近距離因素及環境與行為因素等交互作用外，遺傳與基因的因素亦為造成高度近視的一重要因素。目前被認為與高度近視有關的染色體有2、4、7、10、12、17、18、22及染色體X。而與近視有關的基因如下表一所示： 表一、高度近視相關基因 基因名稱 位置 MYP1 Xq28 MYP2 18p11.31 MYP3 12q21-q23 MYP4 7q36 MYP5 17q21-q22 MYP6 22q12 COL2A1 12q13.11-q13.2 OPEM X TGIF 18p11.3  目前針對華人族群的高度近視基因研究中，最詳盡的為TGIF (transforming growth factor β–induced factor) 基因。TGIF是一個DNA結合同源結構蛋白質 (DNA-binding homeodomain protein)，屬於TALE (three amino acid loop extension)同源 (homeobox) 家族，具有10個exons，基因總長為46kb。TGIF主要的功能為抑制轉錄作用進行 (transcription repressor)(1)，目前已證實TGIF會參與由TGF-β所調控的轉錄作用(2)，並影響維他命A酸反應 (retinoid-responsive) 的轉錄作用(3)。TGIF突變會導致前腦及顱顏發育畸形(4)。之前的研究顯示，染色體18P11位置與華人家族性高度近視有關(5)，此基因座亦影響義大利族群之高度近視(6)。 在2003年，香港中文大學進行一項高度近視基因研究，探討TGIF exon10與高度近視之間的關聯(7)。他們以71個高度近視患者為實驗組，105個近視度數小於200度的人士為對照組，分析比較基因序列差異。結果統計有25個單一核苷酸多型性 (single nucleotide polymorphism，SNP) 位點，在25個SNPs中有6組SNPs與高度近視之間顯著關聯，其中T657G為最具相關性之SNP。此6組SNPs如下表二： 表二、高度近視相關SNPs 核苷酸位置 核苷酸序列 NCBI編號 正常?變異 NM_003244 (2003年版本) NM_003244 (2004年版本) G?A 573 889 T?G 657 973 G?A 667 983 G?A 691 1007 C?A 721 1037 C?G 785 1101 然而，2005年美國賓州大學亦對TGIF基因進行更為詳盡的研究，他們分析7位來自不同家族的高度近視患者之TGIF基因，並將整個TGIF基因進行定序(8)。結果雖然發現有21個SNPs，其中3個SNPs與香港中文大學的研究相同，此三位點為A420G、C488T及T657G。然而這21個SNPs在統計上並無特殊意義，即顯示與高度近視並無關聯。綜合分析許多報告顯示遺傳疾病與種族之間有相關，而此研究採樣數量過少，且7人當中只有1人為華人族群，故此實驗數據僅可供我們參考。此外，雖然TGIF目前較常被探討其與全腦畸形 (holoprosencephaly) 之間的關聯，然而眼球亦包含於腦發育中一環，並不能完全否定TGIF基因與高度近視的關聯。 【步驟與方法】 有鑑於同為華人族群之香港中文大學的研究，我們欲了解TGIF於台灣人族群當中與高度近視的關聯。所以先針對2003年香港中文大學的研究範圍進行探討，我們設計一對能夾出exon3附近區域的引子，比較高度近視與正常度數人士的基因序列差別。此段引子序列如下表三： 表三、睿嘉TGIF定序引子 名稱 序列 核苷酸位置 (NCBI編號 AP001025) 上位引子 Ex3f1 cag aga gca aga tca att agg 193166-193186 下位引子 Ex3r1 Tca tct ctt gcc ttc acc 193901-193895 (位於NM_003244之1181-1198) PCR擴增長度：729bp 截至2006年7月31日為止，睿嘉共定序91個樣品，其中50個樣品的序列為正常， 表四、91個樣品之統計表 正常 變異 樣品數 50 41 變異點 - A420G C488T 變異樣品數 - 38 22 此外，我們亦以生物資訊方式進行多重序列比對 (multiple sequence alig