动物微生物学实验.pptVIP

课程安排 本实验课程共20学时，进行以下10个实验： 实验一 显微镜油浸系的使用及细菌基本形态观察 实验二 细菌抹片的制备及染色 实验三 培养基的制备 实验四 细菌的分离培养及培养性状的观察 实验五 真菌的分离培养及形态观察 实验六 细菌的生化试验 实验七 动物试验法 实验八 凝集试验 实验九 沉淀反应 实验十 主要病原菌的认识 实验一显微镜油浸系的使用及细菌基本形态观察 一.目的要求 1．正确掌握使用及护理显微镜的方法，特别是油浸系的使用及护理。 2．认识细菌的基本形态和构造。 二、油浸系的原理 使用原理是：由于香柏油与玻璃的折光率相似（香柏油为1.515，玻璃为1.52）。镜检时，滴加香柏油的作用是使光源尽可能多的进入物镜中，避免光线通过折光率低的空气（折光率为1.0）而散失，因而能提高物镜的分辨率，使物像明亮清晰。 三 实验器材 普通光学显微镜、标准细菌片、香泊油、 擦镜纸等 四 操作步骤 (一)、普通光学显微镜的构造 普通光学显微镜包括机械部分和光学部分两部分。机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本夹等。光学部分包括接目镜、接物镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜（集光器）等（图1-1）。 （二）、使用方法 镜检者需姿势端正，一般用左眼观察，右眼用于绘图和记录，两眼同时睁开，以减少疲劳。 对光 将光圈完全开放，升高聚光镜与载物台同高，置标本片于载物台上，在低倍镜下对光，用手转动反光镜以调节之，至视野最亮时为止。光线强弱可通过放大或缩小光圈、升降聚光镜、旋转反光镜调节之。 加油 将标本放在载物台上，染色部位正对集光器的中央，用标本夹固定好，滴加香柏油1滴，用油浸镜检查，使油镜头浸入油滴中，几乎与标本面接触为度，然后由接目镜注视镜内，同时慢慢转动粗调节螺旋提起镜筒（绝对不能下降镜筒！）至能模糊看到物像时，再转动细螺旋（细螺旋转动一般不超过一周），直至物像清晰为止。 (四)、细菌正常形态的观察 练习显微镜油浸系的使用，观察已制好的细菌染色标本，如葡萄球菌、链球菌、魏氏梭菌、大肠杆菌、枯草杆菌、炭疽杆菌及细菌的荚膜、芽胞和鞭毛，并进行绘图。 大肠杆菌 炭疽杆菌 链球菌 葡萄球菌 五.显微镜的使用操作及注意事项 1.从镜箱内取显微镜时，应以右手持镜臂以水平方向慢慢抽出，不得碰镜，再以左手托镜座，保持镜体平行，以防反光镜及接目镜滑落。 2.显微镜各镜头绝对不可用手指拭抹，应用擦镜纸或用绸布轻拭之。油镜用过后，立即用擦镜纸拭之，若油渍已干，则需用擦镜纸蘸二甲苯拭之，然后用干燥镜纸轻拭之。镜体可用软布轻拭，以保持清洁。 3.用过后应将显微镜各部复位，尤其注意不要让接物镜对集光器，同时把集光器下降，以免发生碰撞，然后置镜箱内锁好。 4.注意防潮，勿靠近热源及有腐蚀性的化学药品。显微镜各零件不要任意拆卸，尤其是光学部分，以免损坏。 六.思考题 显微镜油浸系的使用原理? 实验二 细菌抹片的制备及染色 一.目的要求 1．掌握细菌抹片的制备方法和几种常用的染色方法。 2．认识革兰氏染色的反应特性。 二.革兰氏染色法原理 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。 该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 三 实验器材 1、活材料：培养12-16h的大肠杆菌（Bacillus thuringiensis）及链球菌. 2、染色液和试剂：结晶紫、革兰氏碘液、95%酒精、碱性复红、二甲苯、香柏油 3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜 四.操作步骤 染色是细菌学上一个重要而基本的技术。由于细菌个体微小，且半透明，如不经染色往往不易识别。因此，借助于染色法可使细菌着色，与背景形成鲜明的对比，便于在显微镜下进行观察。也可根据不同的染色反应，作为鉴别细菌的一种依据。 (一)、载玻片处理 载玻片应清晰透明，清洁而无油渍，滴上水后，能均匀展开，附着性好，如有残余油渍，可按下列方法处理 1.滴上95％酒精2～3滴，用清洁纱布擦拭,然后以钟摆速度通过酒