《基因工程》P上PT课件.pptVIP

第四章 基因工程;一、基因工程诞生的背景 1、理论上的三大发现 ①40年代发现了遗传物质—DNA 1944、T·Avery 肺炎双球菌的转化实验。  ②50年代搞清了遗传物质的分子机制—1953年 Watson and Crick的DNA结构：双螺旋、半保留复制，1958年诺贝尔奖。  ③60年代确立了遗传信息的传递方式—1961 美国尼伦堡(Ninenberg)确立遗传信息以密码形式传递：3=1=1 (3个核苷酸=1个密码子=1个Aa) 1966年破译了64个密码,诞生了“密码字典”。 ;;; 2、技术上的三大发明①限制性内切酶的分离纯化 1970H· Smith 首次分离了Ⅱ型限制酶HindIII，1978年诺贝尔奖②基因克隆载体的应用 1973 Cohen 用作载体 ③逆转录酶的发现 1970 Baltimore and Temin同时发现 —高速、超速离心技术 —电泳技术—微量蛋白提纯技术 —Aa顺序分析技术—基因合成技术 —转化技术的建立—基因工程受体系统的发现;;;;三、基因工程的基本内容;;1、获得目的基因;②限制性内切酶法(鸟枪法,散弹法) 用限制性内切酶降解染色体DNA,将降解的DNA片段克隆到载体上,从而获得目的基因。;;印 迹 法;印迹法的主要步骤：（1）基因文库－ DNA 用限制性内切酶处理。（2）DNA 片断混合物通过电泳分离。（3）电泳后，通过印迹技术转到酯酰纤维薄膜上，以便操作。（4）用已知小片断DNA 作为探针，互补结合需要找的基因片断。（5）探针DNA 片断已用放射性元素标记，使胶片感光后可看出。; 印迹法的关键是“分子杂交”，利用碱基配对的原则，用一段小的已知的 DNA 片断去寻找（“钓”）大的未知的基因片断。 探针 DNA 片断从何而来？ 根据目的蛋白的氨基酸序列，只要其中 N－端 15－20 个氨基酸序列，按三联密码转为 40-60 核苷酸序列，人工合成，即为探针 DNA 片断。;;③逆转录法获得真核生物目的基因 先分离纯化目的基因的mRNA，将其逆转录成单链的DNA,再经过DNA聚合酶的作用产生双链的DNA，从而获得目的基因。;2、目的基因的扩增;反应体系的要求 引物、具有热稳定的酶、dNTP、目的DNA序列;P C R 操作流程;3、构造重组 DNA 分子;用质粒 构建 重组DNA分子;用噬菌体DNA构建 重组DNA分子;4、重组DNA分子导入受体细胞;;5、重组体的筛选;四、基因工程的应用; 基因工程被用于大量生产过去难以得到或几乎不可能得到的蛋白质－肽类药物。 ;1976年第一家基因工程技术开发药物的公司建立。 1982年第一个基因工程药物重组人胰岛素正式生产，推向市场。 2002年全球生物技术公司总数已达4284家，美国占34％。 2004年基因重组生物技术药物的年销售额已经突破400亿美元。 2005年市场上的生物技术药物达到200种左右，而在研的药物为600种。 全世界已有2.5亿人使用生物技术药物和疫苗。 ;2.转基因植物;根癌杆菌介导法; 世界上第一种基因移植作物是一种含有抗生素药类抗体的烟草，1983年得以培植出来。 ;?? ??1994年，美国政府批准了他们研制成功抗干旱、早熟、保鲜的转基因番茄商品化之后，我国也相继成功培育出优良品种的转基因番茄，以满足人们的需求。 ; 甜椒在栽培的过程中，容易受病毒的感染。我国科学工作者，采用转基因技术，培育出抗病毒的甜椒。;???? 油菜是人们食用油的主要来源之一。一般油菜籽的含油量约为40％左右。通过转基因技术，培育出来的油菜籽，可以大大地提高它的出油率。而且油的纯度质量更好。 ;??? 玉米是主要粮食之一，又可以提炼油脂，也可以用作食品和工业的原料以及作饲料，浑身是宝。人们称它是含金的植物。如今培育出转基因玉米，品质更好，产量更高。;?我国科学工作者，用转基因技术，可以转变矮牵牛花的花色，使矮牵牛花的花色更加丰富多彩。 ; ????从植物体中分离出合成赖氨酸的基因，把这基因转入小麦植株中，培育出转基因小麦。用这种转基因小麦制造出来的面粉，更适合用来烤面包，而且面粉中赖氨酸含量高，这种面包的营养价值高。 ;转基因抗虫棉; 借助基因工程技术把外源目的基因导入生殖细胞、胚胎干细胞和早期胚胎，并在受体染色体上稳定整合，使之经过各种发育途径得到能把外源目的基因传给子代的个体，即转基因动物(transgenic?animal)。 ; 转基因动物首先在小鼠获得成功。;DNA微注射法;; 中国科学院水生生物研究所朱作言首次