适于双向电泳分析的番茄叶片总蛋白提取方法的优化-浙江农业科学.PDF

浙江农业学报 !（）： ， !#$ !%’()#($* +,*- ’$.%*./’/ # $ ! % $ #’’$ 适于双向电泳分析的番茄叶片总蛋白提取方法的优化 ! # # ， 徐幼平 ，徐秋芳 ，蔡新忠 ! ! # （浙江大学 分析测试中心，浙江 杭州 (!’’# ；浙江大学 生物技术研究所，植物保护系，浙江 杭州 (!’’# ） 摘 要：比较了三氯乙酸（ ）、酚和十二烷基硫酸钠（ ）种提取方法在所获番茄叶片总蛋白产量及其在 )*+ ,-, ( 聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率等方面的区别，并对 种蛋白溶解液以及超声处理在蛋白质溶解中的作用进 ,-, ( 行了分析探讨。结果表明， 提取法最佳，该方法提取番茄叶片总蛋白的得率最高、所获蛋白在 聚丙 )*+ ,-, 烯酰胺凝胶电泳中形成条带数目最多，最清晰；酚法次之； 法最差。由离液剂和去污剂组成的蛋白溶解液 ,-, 复溶蛋白沉淀所获蛋白产量显著高于)./0123*4 溶解液。还原剂和两性电解质以及超声处理显著增进蛋白质 的溶解，提高蛋白产量。采用 提取法获得蛋白沉淀，再以溶解液 （ 尿素， 硫尿， )*+ ! $ 5647 8 # 5647 8 # 9 ， ， ， 两性电解质）溶解，结合超声助溶的方法体系可以获得高得率和高电 *:+;, # 9 ,(1 !’ = 55647 8 -)) ’ ?# 9 泳分辨率的番茄叶片总蛋白样品，该方法适用于双向电泳分析等下游操作。 关键词：番茄；蛋白；双向电泳；三氯乙酸；两性电解质；超声处理 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） @’( + !’’ A !# #’’$ ’# A ’’$ ! A ’ !#$%$’#$() (* #(#’+ ,(#-$) -.#,’/#$() *,(% #(%’#( +-’0-1 *(, #2(34 5-+ -+-/3 #,(6(,-1$1 ’)’+71$1 ! # # ， ! ， ， BC D6E1F/GH BC @/E1I3GH *+J B/G1KL6GH ! # （