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* 理解·教材新知 把握·命题热点 应用·落实体验 课堂回扣练习 命题点一 命题点二 知识点一 知识点二 1.2 基因工程的基本操作程序 专题1 命题点三 知识点三 部分基因文库(如cDNA文库) 基因组文库 人工合成 PCR技术扩增 基因文库的构建 方法 过 程 部分基因文库(如cDNA文库) 基因组文库 人工合成 PCR技术扩增 基因文库的构建 方法 适用范围小 需要严格控制温度、技术要求高 操作过程较麻烦,技术要求过高 工作量大、盲目性大、专一性差 缺 点 专一性强,可产生自然界中不存在的新基因 可在短时间内大量扩增目的基因 专一性强 操作简单 优 点 部分基因文库(如cDNA文库) 基因组文库 人工合成 PCR技术扩增 基因文库的构建 方法 DNA片段或基因 DNA分子 合成的对象 需控制温度,在较高温度下进行 细胞内温和条件 温度条件 耐热的DNA聚合酶(Taq聚合酶) DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等 酶 细胞外(主要在PCR扩增仪内) 细胞内(主要在细胞核内) 场所 DNA在高温作用下变性解旋 解旋酶催化 解旋方式 区别 PCR技术 DNA复制 ①模板:均需要脱氧核苷酸链作为模板进行物质合成 ②原料:均为四种脱氧核苷酸 ③酶:均需要DNA聚合酶进行催化 ④引物:均需要引物,使DNA聚合酶从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 联系 PCR技术 DNA复制 感受态细胞法 显微注射技术 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 常用方法 原核细胞 受精卵 体细胞 受体细胞 微生物 动物 植物 生物类型 Ca2+处理细胞 ↓ 感受态细胞 ↓ 基因表达载体与 感受态细胞混合 ↓ 感受态细胞 吸收DNA分子 提取含目的基 因的表达载体 ↓ 显微注射 ↓ 受精卵发育 ↓ 具有新性状的个体 以农杆菌转化法为例: 将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 ↓ 转入农杆菌中 ↓ 导入植物细胞 ↓ 整合到受体细胞的DNA上 转化过程 微生物 动物 植物 生物类型 *
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