AOAC 官方方法 2003.08 选定乳制品中金黄色葡萄球菌的计数.pdfVIP

AOAC 官方方法 2003.08 （f ） NaOH 溶液－无菌，浓度1M。将20g NaOH 置 选定乳制品中金黄色葡萄球菌的计数 于500mL 能承受压热器作用的容器中，用500mL 水溶 3MTMPetrifilmTM 金黄色葡萄球菌测试片法 解。在121℃下高压灭菌处理15 分钟。 首次发布 2003 （g ）磷酸盐缓冲稀释液— （1）原液－将34g KH PO 2 4 （适用于冰淇淋、原奶、酸奶、奶酪和乳清粉中金黄色 溶解于500mL 水中，用大约175µLNaOH 溶液（1M） 葡萄球菌的计数） 将溶液pH 值调整至7.2，并稀释到1L。储存于冰箱中。 （2 ）稀释剂－用水将1.25mL 原液稀释至 1L。用此溶 注意：检测材料在使用以后要经过高压灭菌处理。 液制备稀释空白液。配制足够多的溶液，以弥补高压灭 表格2003.08 为验证并采纳该方法的多个实验室的研究 菌处理中的溶液损耗。在 121℃下高压灭菌处理 15 分 结果。 钟. A. 原理 （h ）搅拌器－配有灭菌罐的高速搅拌器（16000 － 18000 rpm） Petrifilm 金黄色葡萄球菌测试片是一种即用型的培 （i ）培养器－温度保持在35±1℃或者37±1℃。 养基系统，含有冷水可溶性凝胶。测试片中的用于显色 （j ） 天平－秤重范围2000±1g 的经过改良Barid-Parker 培养基对于金黄色葡萄球菌有 （k） pH 指示剂－测量范围在6.0-8.0 之间。 选择性作用。在每个测试片中加入1.0mL 的经过稀释的 样品用于检测。接种后使凝胶剂固化，并将测试片在 C. 测试用样品均液的制备。 35±1℃或者37±1℃下培养24±2 小时。测试片上紫红色 使用秤重为2kg 敏感度为0.1g 的天平B （j ），在无 的菌落为金黄色葡萄球菌。当只有紫红色菌落出现时， 菌情况下称取50g 的测试样品置于搅拌器B （h）中。 计算菌落数，测试结束。 加入450mL 水稀释B （g ），并以16000 至 18000rpm 如果检测中出现了背景菌落，要使用 Petrifilm 确认 的转速搅拌2 分钟，使其均质。如果全部的测试样品质 反应片来识别疑似菌落中的金黄色葡萄球菌。只要有其 量小于50g，称取样品并加水，以1:10 的比例进行稀释。 它颜色的菌落出现在测试片中，比如黑色菌落或者蓝绿 按要求用1M 的NaOH 溶液将稀释后的溶液的pH 值调 菌落，就要使用Petrifilm 确认反应片。Petrifilm 确认反 整到6.0 至8.0 （样品浓度大约为0.1mL/g ）。不要使用 应片含有指示剂和脱氧核糖核酸。金黄色葡萄球菌生成 柠檬酸盐，酸性亚硫酸盐或者硫代硫酸盐的稀释液，因 脱氧核糖核酸酶（DNase），与指示剂反应产生粉红色 为它们会抑制细菌生长。以90mL 水和前一次溶液中的 区域。将确认反应片插入测试片中，将它们一起在 10mL 溶液相混合，制取所有的十倍