动物基因组DNA总RNA测定(精).pptVIP

目的要求 学习和掌握从动物组织中提取核酸的原理和操作技术； 了解提取DNA/RNA的几种方法，原理和优缺点； 学习测定DNA/RNA含量的基本原理及具体方法。 理论基础 核酸是遗传信息的携带者，是生命的最基本物质，它和蛋白质是构成生物体的主要成分； 按化学组成可以将核酸分成两大类： ① 含脱氧核糖核酸（DNA），主要存在于细胞核中； ② 含核糖核酸（RNA），主要存在于细胞质内； 在生物体中核酸以结合成核蛋白的形式存在，但核酸极不稳定，在较剧烈的物理、化学因素和酶的作用下都很易降解。 1、RNA的提取与测定 RNA广泛存在啤酒酵母，面包酵母，酒精酵母和各种动物组织中。 常见方法（依据RNA的种类和来源）： ①苯酚法（实验室最常用的方法） ②去污剂法、③盐酸胍法， 苯酚法：组织匀浆后用苯酚处理离心，RNA即溶于上层被苯酚饱 和的水相中， DNA和蛋白质则留在苯酚层中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮状沉淀析出。 优点：较好除去DNA和蛋白质，且获得生物活性的RNA。 RNA 提取 匀浆：称取3克牛肝剪碎，加20mL 0.14mol/L氯化钠溶液10000r/min左右匀浆1分钟左右；　 离心：匀浆后溶液离心8000 r/min离心7分钟，量取上清液毫升数，沉淀物留做提取DNA； 除杂质：于上清液中加入等体积80％苯