第七章微生物遗传变异案例.pptVIP

复制子 限制性内切酶位点 选择性遗传标记 可大量增殖 载体的特性 常用载体 原核受体细胞： 松弛型细菌质粒、λ噬菌体 真核细胞受体： SV40病毒（动物）、Ti质粒（植物） 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 将E.coli分别培养在以放射性32PO43-或35SO42-作为磷源或硫源的组合培养基中，可以获得含32P-DNA的噬菌体或含35S-蛋白质的噬菌体。 将两种带有不同放射性的噬菌体分别感染寄主，10min后用捣碎器使噬菌体外壳脱离寄主细胞，离心后测定上清液和沉淀的放射性。 （1）含32P-DNA的一组：放射性85%在沉淀中 （2）含35S-蛋白质的一组：放射性75%在上清液中 挑选优良的出发菌株（original strain） 选用出发菌株的一般原则： ①最好是经过生产中选育过的自发变异菌株； ②采用具有优良性状的菌株，如生长速度快、营养要求低以及产孢子早而多的菌株 ③选择已发生其他变异的菌株作为出发菌株； ④在细菌中发现一类称为增变菌株的变异菌株，更适宜作出发菌株； ⑤在选择产核苷酸或氨基酸的出发菌株时，最好考虑至少能累积少量所需产物或其他前体的菌株，而在选择产抗生素的出发菌株时，最好选择已通过几次诱变并发现每次的效价都有一定程度提高的菌株作为出发菌株。 对单细胞微生物必须处理单细胞、均匀悬液的原因 分散状态的细胞可以均匀接触诱变剂， 避免长出不纯菌落。 处理霉菌或放线菌孢子、芽孢杆菌芽孢的原因： 丝状微生物的细胞内同时含有几个核，芽孢杆菌的营养细胞一般含有两个核质体，故某一突变无法反映在当代的表型上。只有当经过DNA的复制核细胞分裂后，这一变异才会在表型上表达出来，于是出现了不纯菌落，这就叫表型延迟（phenotypic lag） （或由于诱变剂一般只作用于DNA双链中的某一条单链，也会出现表型延迟）。这也是诱变育种工作中初分离的菌株经传代后很快出现生产性状“衰退”的主要原因。 细胞的生理状态对诱变的效果会发生很大的影响。 获得均匀分散的细胞悬液的方法：用无菌的玻璃珠打碎成团的细胞，然后再用脱脂棉过滤。诱变后出现的不纯菌落，则可用适当的分离纯化方法加以纯化。 方法： 三角瓶内加φ0.5cm玻璃珠打散10-15min; 加０.3%吐温80（表面活性剂） 用无菌脱脂棉过滤。 诱变剂剂量一般指强度与作用时间的乘积。各种诱变剂有不同的剂量表示方式，如化学诱变剂以一定温度下诱变剂的浓度和处理时间来表示。在育种实践中，常以杀菌率来作诱变剂的相对剂量。 诱变剂的合适剂量：凡在提高诱变率的基础上，能扩大变异幅度，促使变异移向正变范围的剂量，就是合适的剂量。 要确定一个合适的剂量，常常要经过多次试验。就一般微生物而言，在一定的剂量范围内，突变率往往随剂量的增高而提高，但正变较多出现在偏低的剂量中，而负变则较多出现在偏高的剂量中；还发现经多次诱变而提高产量的菌株中，更容易出现负变。因此，在诱变育种工作中，目前大家比较倾向于采用较低的剂量。 充分利用复合处理的协同效应（synergism） 诱变剂的复合处理常常呈现一定的协同效应，这对育种工作是很有参考价值的。复合处理有几类： ①两种或多种诱变剂的先后使用； ②同一种诱变剂的重复使用； ③两种或多种诱变剂的同时使用。 设计和采用效率高的筛选方案和方法: 一般通过初筛与复筛两种方法对突变株进行生产性能的测定。 初筛既可在培养皿平板上进行，也可在摇瓶中进行，两者各有利弊。 复筛是对突变株的生产性能作比较精确的定量测定。一般是将微生物摇瓶培养，然后再对培养液进行分析测定。 不仅需要设计效率更高的筛选方法，还应努力推广筛选操作的自动化和电子计算机化。 基因重组是生物体在未发生突变的情况下，产生新的遗传型个体的现象。杂交： 是遗传类型不同的个体相互交配或结合，产生杂种的过程。 * 三、菌种保藏 目的：在一定时间内使菌种不死、不变、不乱，以供研究、生产、交换之用 基本原则： 1、挑选典型菌种的优良纯种 2、尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体 3、创造有利于休眠的保藏环境（如干燥、低温） 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株 遗 传 变 异和育种 物质基础：DNA或RNA 存在的部位和方式 质粒