小鼠iPSCs诱导分化为胰岛素分泌细胞及治疗糖尿病的-北京大学学报.PDF

·118 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2016，32﹙1﹚：118-123 ［文章编号 ］1000-4718（2016）01-0118-06 小鼠诱导分化为胰岛素分泌细胞 及治疗糖尿病的实验研究٭ ∆ 1 ﹙暨南大学第二临床医学院，深圳市人民医院干细胞与细胞治疗重点实验室，广东深圳518020； 2暨南大学医学院，广东广州510632﹚ ［摘 要 ］目的：利用3步法诱导方案，使小鼠诱导多能干细胞﹙induced pluripotentstem cells，iPSCs﹚分化为 胰岛素分泌细胞﹙insulin-producingcells，IPCs﹚，观察诱导效率和成熟度，并观察其对糖尿病小鼠治疗效果。方法： 本实验室通过piggyBac转座子将C57/C 雄性小鼠来源胚胎成纤维细胞﹙mouse embryonicfibroblasts，MEFs﹚构建为 小鼠iPSCs，利用3步法诱导方案分化为IPCs，观察细胞分化过程中的形态变化；RT-PCR 和免疫荧光检测其胰岛 β 细胞发育相关基因和蛋白的表达；流式细胞术分析分化效率；葡萄糖刺激实验检测胰岛素和C 肽分泌水平。将 IPCs移植入C57/C 雄性糖尿病小鼠模型左肾包膜下，监测血糖和血清中胰岛素含量28 d，观察逆转高糖血症的效 果。结果：建立的3步诱导方案可以将小鼠iPSCs诱导分化为IPCs，其表达胰岛 细胞的标志性基因﹙Pdx1、Ngn3、 β Pax6和Ins2﹚和蛋白﹙Pdx1、Nkx6.1和胰岛素﹚，在葡萄糖刺激下可分泌胰岛素和C 肽。流式细胞术结果表明诱导 分化的效率达28% 。移植后3 d糖尿病小鼠血糖即降低至接近正常水平，血清胰岛素含量明显升高，对葡萄糖的 调控能力明显增强。病理学观察IPCs细胞移植28 d后仍存活。结论：建立的3步诱导法可将 iPSCs高效定向诱 导分化为IPCs，明显缩短了诱导分化的时间，移植至近交系同性别小鼠体内可逆转糖尿病的高糖血症。 ［关键词 ］诱导多能干细胞；胰岛素分泌细胞；糖尿病 ［中图分类号 ］R363；R587.1 ［文献标志码 ］A doi：10.3969/j.issn.1000-4718.2016.01.020 ，2 1 1，2 1，2 1 1 ，W EIPei，YANG Xiao-fei ，YANG Lu ，DENG Chun-yan ，QIHui， LIFu-rong1 ﹙TheKeyLaboratoryofStem CellandCellularTherapy，TheSecondClinicalM edicalCollege，ShenzhenPeople’sHospital，1 2 JinanUniversity，Shenzhen518020，China；SchoolofM edicine，JinanUniversity，Guangzhou510632，China.E-mail：fr- li62@ 163.com ﹚ ［］ ：To inducemouse inducedpluripotentstem cells﹙iPSCs﹚todifferentiateinto insulin-produ- cingcells﹙IPCs﹚by a new 3-step method，and t