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宫颈癌筛查的首选人乳头瘤病毒（HPV）分型的检测制作人：刘海峰 目　录 宫颈癌与HPV关系 HPV简介 HPV的生物学特点 HPV感染特点 HPV基因分型检测原理 HPV基因结构特点 常用HPV检测方法 HPV的基因分型 HPV标本的采集处理与保存 哪些人群更容易患宫颈癌 性生活过早的妇女 早孕多产或多次人工流产的妇女 自身或性伴侣有多个性伴侣的妇女 曾经货正患有生殖道HPV、单纯疱疹病毒、HIV感染或其它性传播疾病的妇女。 吸烟、吸毒、营养不良的妇女 有宫颈病变（长期慢性宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌、子宫内膜癌、阴道癌或外阴癌）病变的妇女 感染途径 1、性传播途径 2、密切接触 3、间接接触：通过接触感染者的衣物、生活用品等 4、医源性感染：医务人员在治疗护理时防护不好，造 成自身感染或通过医务人员传给患者 5、母婴传播：是由婴儿通过孕妇产道的密切接触 常见宫颈癌筛查方法的对比 宫颈癌的首选— HPV检测 　　与细胞学检查相比，HPV检测具有更高的敏度 和重复性。国际权威机构—欧洲生殖感染和肿瘤 研究组织推荐将HPV检测作为宫颈癌筛查的首选方 法。 简　介 什么是人类乳突病毒 ？ 　　 　　人类乳突病毒（Human Papillomavirus，简称HPV）是一种嗜上 皮性病毒，有高度的特异性，长期以来，已知HPV可引起人类良性的 肿瘤和疣，如生长在生殖器官附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐 湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。像乙肝病毒一样，HPV也是一种 DNA病毒。它原是多瘤空泡病毒科的一员，1999年国际病毒分类委员 会（ICTV）取消多瘤空泡病毒科，代之以乳头瘤病毒科，因此，HPV 便归属此门下。 HPV的生物学特点 　　 　　1、HPV为小DNA病毒，通常引起生殖器疣、子宫颈及肛门、生殖道 癌。目前已完全鉴别到的HPV有80种型，型与型之间的差异在于基因结 构的不同，基因结构的差异决定其存在部位及可能导致的皮肤病变类 型。 　　2、乳头瘤病毒科的成员主要包括人乳头瘤病毒、牛乳头瘤病毒、 狗口腔乳头瘤病毒、棉尾兔乳头瘤病毒、多乳房小鼠乳头瘤病毒和鹿 乳头瘤病毒。 　　3、HPV呈球形，无包膜，20面体立体对称结构。HPV基因组是双链 环状，以共价闭合的超螺旋、开放的环状DNA结构。 HPV感染特点 初次感染HPV大部分可自行消退。与病毒的侵袭能力和感染者的免疫状态相关，连续多次的HPV感染会引发女性子宫颈发生病变，并可能导致子宫颈癌。 HPV感染后以整合和非整合两种状态存在于宿主细胞。 性行为和年龄是两个HPV相关性肿瘤的高危因素。 感染高峰年龄:17-33岁；每年新感染的病例，高峰年龄为20～24岁。 HPV基因分型检测原理 采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交相结合的DNA芯片技术。 利用HPV的基因特点设计特异引物，可以扩增出23种HPV基因型的目标片段，再将扩增产物与固定在膜条上的包括18种高危型和5种低危型在内的分型探针进行杂交，依据杂交信号的有无来判断是否有这些HPV基因型的存在。 HPV基因结构特点 为双链环状DNA，长约8kb，由8个ORF框组成，按基因功能可分为长控制区（上游调控区）、早期基因区（E1、E2、E4-E7）编码六个早期蛋白和晚期基因区（L1、L2）编码两个晚期蛋白。 E1、E2与病毒的复制有关，E6、E7是癌基因，分别与抑癌基因P53、pRb结合并导致其失活，这是高危型HPV感染与子宫颈癌发生的重要分子机制。 L1、L2编码病毒的结构蛋白形成病毒外壳，L2蛋白在病毒感染靶细胞的过程中及其感染后的生命周期中都发挥着重要的作用。不同型别HPV L2蛋白8-81、90-115和280-333(以HPV16为基准)区域的氨基酸序列高度保守 。 HPV基因结构图 常用HPV检测方法的分析 一、染色镜检： 　　将疣状物作组织切片或生殖道局部粘液涂片，用帕尼科拉染剂染色 后，光镜下观察到特征性空泡细胞或角化不良细胞和角化过度细胞，可 初步HPV诊断。 二、HPV－DNA检测： 　　根据不同标本