如何清洗和保存相色谱柱.docVIP

如何清洗和保存反相色谱柱？ 如何清洗和保存反相色谱柱？怎样处理新买来的色谱柱？用水来冲洗色谱柱有什么后果？分析结束后如何冲洗？这些问题是HPLC分析人员常常面对的。本文就这些问题介绍一些色谱柱的维护和保养经验。新色谱柱的处理对于新购买的色谱柱，首先应该做些什么呢？几乎所有的色谱柱在出厂时都保存在它们测试时的溶剂中，通常是60-80%的甲醇/水，这与在反相色谱中使用的流动相是兼容的，所以可以直接转换到所要使用的流动相。另外，也可以先用20-30ml流动相中的强溶剂甲醇、乙腈或者四氢呋喃冲洗色谱柱，然后再转换到所需流动相。需注意的是，在冲洗或平衡色谱柱时，重要的是溶剂的体积而不是冲洗时间。提高流速可以缩短冲洗平衡时间。如果使用有机溶剂和水或缓冲溶液，10倍柱体积的流动相可以使色谱柱达到冲洗平衡。如果流动相使用离子对试剂，则需20-50倍柱体积的流动相。对于直径4.6mm的色谱柱，其柱体积可以按下式估算：Vm=0.1L其中，Vm为柱体积（ml），L为色谱柱的长度（cm）。故一个15cm x 4.6mm色谱柱大概的柱体积为1.5ml。直径2.1mm的色谱柱的柱体积大约为4.6mm的20%，所以5cm x 2.1mm的色谱柱含溶剂为100uL。对于B型高纯硅胶基质填料的色谱柱，色谱柱的再现性很规范，这与15年前普遍使用的、不是很纯的A型硅胶基质填料的色谱柱形成鲜明对比