第七章节 微生物的 生长 繁殖跟跟其控制文档.docVIP

第七章 微生物的生长繁殖及其控制 第一节 微生物生长繁殖及其测定 一、 微生物生长繁殖 个体生长：原生质总量增加，个体增大 繁殖：个体数目增加 群体生长：个体生长＋个体繁殖＋代谢产物增多 二、纯培养的分离方法 纯培养：在实验条件下从一个细胞繁殖得到纯种群体 分离原理：稀释样品，使各种细胞分开，再培养，使单个细胞生长繁殖成单菌落.挑取单菌落，再在平板上加以3－5次划线纯化。 稀释混合倒平板法 涂布法 划线法 单细胞挑取法：用显微挑取器 选择培养基分离法 其它分离方法: 产孢菌分离：可先加热，杀死营养细胞，再分离 病原微生物分离：选取敏感组织 细胞数量少样品分离：先富集培养或浓缩样品 三、微生物生长的测定 （一）测生长量 1 直接法： 称重量法：离心沉降物干重 测体积法：离心沉降物体积 2 间接法 比浊法：分光光度计，450～650nm波长 生理指标法：含氮量；核酸；好氧量等 （二）计繁殖数 1 直接法：计数板计数法（如血球计数板） 2 间接法：平板菌落计数法 为活菌计数法 把菌液稀释后，取一定量混合倒平板或涂布平板，培养后，每一个活细胞就形成一个菌落，此即菌落形成单位（colony forming unit,cfu）。根据每皿上 cfu数推算出样品含活菌数 稀释倒平皿菌落计数法: 第二节 微生物的生长规律 一、同步生长(synchronous growth) 使培养基中细菌同时分裂，处于相同的生长阶段叫同步生长。获得同步生长(synchronous growth)的方法：诱导法：如芽孢诱导萌发、藻类光照控制 机械选择法 过滤法 离心法 二、单细胞微生物的典型生长曲线 生长曲线（growth curve）:定量描述液体培养基中微生物群体生长规律的曲线 单细胞微生物的典型生长曲线：把少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中，在适宜条件下培养，以细胞数目的对数对时间作图所得曲线。根据生长速率不同可分为延滞期、指数生长期、稳定期和衰亡期 单细胞微生物典型生长曲线: （一） 延滞期(lag phase) 1 延滞期特点 净生长等于零或略有下降 菌体粗大 ＲＮＡ含量增加 代谢活力强 对不良条件抵抗能力降低 2 延滞期出现原因 适应新环境；需要合成多种酶，尤其是胞外酶；DNA复制 影响延滞期限长短因素 接种龄 接种量 培养基成分 4 生产上：缩短延滞期 可以缩短生产周期，提高设备利用率。 接种对数生长期的菌种，采用最适菌龄 加大接种量。一般10％ 用与培养菌种接近的组分的培养基 （二） 指数期(对数期)(exponential phase) 1 特点 活菌数和总菌数接近 酶系活跃，代谢旺盛 生长速率最大，代时（generation time）最短 细胞的化学组成及形态，生理特性比较一致 生产上：多利用做该期的细菌种子和科学试验材料 2 出现原因 细胞适应了新环境，开始大量分裂 营养充足 pH值EH值等理化条件适宜 有害代谢产物少 （三） 稳定期(stationary phase) 1 稳定期特点 活菌数保持相对稳定，总菌数达最高水平。 细菌次级代谢物和代谢副产物大量积累 芽孢杆菌这时开始形成芽孢 稳定期中后期是生产收获时期：需要菌体在中期收获；需要发酵产物，尽量延长此期 2 出现原因 营养的消耗 营养物比例失调 有害代谢产物积累 pH值、EH值、温度等理化条件变化 3 生产上：延长稳定期 补料：补充营养 在线调节pH值、EH值等理化条件 取走产物 以上方法连续在线进行－－－连续培养 （四） 衰亡期(decline phase/death phase) 1 特点 细菌死亡数大于增殖数,活菌数明显减少,群体衰落 细胞出现多形态,大小不等的畸形,变成衰退型 细胞死亡,出现自溶现象 2 生产上：避免衰亡期 要连续监测发酵情况，最好在稳定期中后期停止发酵，避免进入衰亡期。一可缩短周期，二可避免细胞溶解物造成产物提取困难 三、分批培养（batch culture)和连续培养(continuous culture) （一）分批培养： 将微生物置于一定容积的培养基中培养，最后一次收获 （二）连续培养：将微生物放在恒定容积的流动系统中培养，连续添加培养基，并以相同速度取走培养物 优点：缩短发酵周期；便于自动控制；产物质量均一 缺点：菌种易退化；易染杂菌 第三节 影响微生物生长的主要因素 物理因素：温度、湿度、渗透压、射线、超声波 化学因素：营养条件、O2、pH值、化学药物 生物因素：在混杂群体中受其它微生物影响 一、温度 最适生长温度和最适发酵温度往往不一致 低于最低生长温度时停止生长：低温菌种保藏 高于最高耐受温度时死亡：酶失活，高温杀菌 根据最适生长温度（optimum growth temperature）分类