免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用.ppt

第十三章 免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用;第十三章 免疫细胞的分离与免疫细胞功能检测及应用;; 三、NK细胞活性测定 第五节 其他免疫细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测 二、巨噬细胞功能检测 第六节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用 ;;第一节 免疫细胞的分离 ; 一、外周血单个核细胞分离 ;细胞分离基本原理;不同细胞密度不同;不同细胞密度不同;用1.077±0.001的分层液可将细胞分离 　;分离液的基本要求;密度梯度离心法（density gradient centrifudation);密度梯度离心(Ficoll)离心　;密度梯度分离单个核细胞（Ficoll分层液）;密度梯度分离单个核细胞（Ficoll分层液）;二 、淋巴细胞分离;贴壁黏附法 将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃温箱静置1h左右，单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴??的非粘附细胞几乎为纯淋巴细胞，继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因B细胞也有贴壁现象，用本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。 ;2.吸附柱过滤法 将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶SephadexG10的柱层中，凡有粘附能力的细胞绝大部分被吸附而粘滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行，对细胞极少损害。 ;Percoll (商品名） 经过聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrolidone,PVP)处理的硅胶颗粒大小不一的混悬液。 高速离心后，形成连续密度梯度，可将密度不同的细胞分离纯化。分离淋巴细胞纯度达98% ，单个核细胞纯度达78% 。流程长、烦琐、费用高。;密度梯度分离单个核细胞（ Percoll分层液）;E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 ;E花环分离法;; 尼龙棉柱分离法;方法评价：;四、T细胞亚群的分离 ;亲和板分离法; 利用亲和层析法分离淋巴细胞亚群，其原理是各种淋巴细胞亚群具有不同的抗原性，将相应抗体结合于塑料平板上，继加细胞悬液，凡抗原阳性的细胞则与相应抗体结合，抗原阴性的细胞可从未吸附的细胞悬液中获取。同样若用特异性抗原交联在塑料板上，则可分离得具有特异抗原受体的淋巴细胞。淋巴细胞受体与特异抗原或抗体接触，可引起细胞激活，因此，凡欲去除细胞悬液内某一细胞亚群时，本法更适用。如要分离CD4+或CD8+细胞，则可用抗CD4或CD8单克隆抗体吸附。用抗Ig抗体则可分离B细胞。同样，用活化的C3包被，可分离出有C3受体的细胞。 ;荧光激活细胞分离仪分离法 ;（五）免疫磁珠法;直接法;;磁珠大小可以选择;大小免疫磁珠分离细胞的特点比较;　;;免疫磁珠法细胞分选过程;免 疫 磁 珠 细 胞 分 选 装 置;全自动细胞分选系统;流式细胞分析仪;细胞分选;;第二节 淋巴细胞标志及亚群分类;细胞表面分化抗原（CD抗原）;一、T细胞表面标志及其亚群 ;二、B细胞表面标志 ;三、NK细胞表面标志 ;T细胞及NK细胞;第三节 抗原提成细胞表面标志的检测;抗原递呈细胞（antigen presenting cells，APCs）是一类能摄取、加工、处理抗原，并将抗原信息递呈给T细胞的重要免疫细胞。 包括专职APC（professional APC） ：单核－巨噬细胞、树突状细胞（dendritic cell，DC）、B细胞 非专职APC（non-professional APC） ：内皮细胞、纤维母细胞、各种上皮和间质细胞 ;;一、 单核吞噬细胞系统 ; 因此，1972年世界卫生组织正式提出了单核吞噬细胞系统的概念（mononuelear phagocyte system，MPS）。它指出：该系统是指分散在许多器官和组织中的一些形状不同、名称各异、但都来源于骨髓的单核细胞，且具有吞噬能力和活体染色反应的一类细胞。 中性粒细胞虽有吞噬能力，但无活体染色反应，更非由单核细胞转变而来，故不属此系统。 ;一般认为单核吞噬细胞系统的成员有如下几种细胞： 骨髓：多能干细胞→单核母细胞→前单核细胞 ↓ 骨髓和血液： 单核细胞（血液） 各种组织：组织细胞（结缔组织） 枯否氏细胞（肝） 尘细胞（肺） 巨噬细胞（淋巴结、脾、骨髓） 破骨细胞（骨组织） 小胶质细胞（神经组织） 郎格罕细胞（皮肤）;单核吞噬细胞系统功能： 1、吞噬清除 2、参与免疫应答 3、分泌功能 ;二、树突状细胞（dendritic cel