舒巴坦残留检测方法标准试行.DOC

附件5 舒巴坦残留检测方法标准（试行） 动物性食品中舒巴坦残留量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了动物性食品中舒巴坦残留检测的制样和高效液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于牛奶中舒巴坦残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 牛奶中舒巴坦用盐酸和乙酸乙酯提取，经固相萃取柱净化，洗脱液氮气吹干，残渣用水-乙腈复溶，高效液相色谱-串联质谱法检测，以外标法定量。 4 试剂和材料 除特殊注明外，以下所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。 4.1 舒巴坦对照品（分子式：C8H11NO5S）：纯度≥90.6%。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲醇：色谱纯。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5 0.5mol/L盐酸溶液：准确量取浓盐酸8.40mL，加水稀释至200mL即得，常温保存。 4.6 5%乙腈溶液（含0.1%甲酸）：准确量取水950mL，置于1000mL容量瓶中，加入1mL甲酸，加乙腈稀释至刻度，配制成水-乙腈（95∶5，V/V，含0.1%甲酸）溶液，现用现配。 4.7 储备液：取舒巴坦对照品约10mg，精密称定，置10mL棕色容量瓶中，用适量水溶解并稀释至刻度，配制成1000μg/mL的储备液。在-20℃条件下保存2 4.8 标准工作液：取适量1000μg/mL舒巴坦储备液，用水依次稀释成80、200、400、800、2000ng/mL的标准工作液，现用现配。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱串联质谱仪。 5.2 分析天平：感量为0.00001g 5.3 天平：感量为0.01g。 5.4 氮吹仪。 5.5 涡旋混合器。 5.6 高速冷冻离心机。 5.7 Milli-Q 超纯水仪。 5.8 具塞塑料离心管：50mL和100mL。 5.9 阴离子固相萃取柱，如MAX固相萃取柱，规格：60 mg/3mL，或效能相当者。 5.10 针筒过滤器：孔径0.22μm。 6 样品的制备与保存 6.1 样品的制备 取适量新鲜或解冻的空白牛奶，混匀。 —取均质的供试样品，作为供试试料。 —取均质的空白样品，作为空白试料。 —取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。 6.2 样品的保存 -20℃以下保存。 7 分析步骤 7.1 提取 取（2±0.01）g牛奶至50mL离心管中，加入0.5mol/L盐酸溶液1mL，涡旋混匀，加入氯化钠2g、乙酸乙酯5mL，涡旋混匀，10000转/分钟4℃离心10min。将上清液转移至15mL离心管中。再加入乙酸乙酯5mL，重复提取一次。合并两次提取液。40℃氮气浓缩至干，用0.1%甲酸溶液（pH5.60） 7.2 净化 分别用3mL甲醇、水、0.1%甲酸溶液（pH5.60）依次活化固相萃取柱，上样流速控制在1滴/秒。分别用0.1%甲酸溶液、水各2mL淋洗，真空抽干。2%甲酸的乙腈溶液5mL洗脱，收集洗脱液，37℃氮气吹干，加入5%乙腈溶液（含0.1%甲酸）500μL 7.3 基质匹配标准曲线的制备 取5份空白牛奶样品，按照上述实验操作步骤提取、洗脱、液氮吹干后，分别移取不同浓度的舒巴坦标准工作液80.0ng/mL、200.0ng/mL、400.0ng/mL、800.0ng/mL和2000.0ng/mL各500μL溶解残余物（相当于20.0ng/g、50.0ng/g、100.0ng/g、200.0ng/g、500.0ng/g的基质匹配标准溶液），过滤后进行测定，每个浓度设3个重复。以标准溶液浓度为横坐标，舒巴坦特征离子质量色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线，绘制基质匹配标准曲线。 7.4 测定 7.4.1 色谱条件 流动相：A-乙腈；B-10mmol/L甲酸铵溶液；梯度洗脱程序见表1。 色谱柱：Acquity UPLC? BEH C18柱（50mm×2.1mm，1.7μm）或效能相当的色谱柱。 流速：0.3mL/min。 柱温：40℃ 进样量：5μl 表1 梯度洗脱条件 时间（分钟） A相（％） B相（％） 曲线 0.0 2 98 1 3.0 95 5 6 4.0 2 98 1 5.0 2 98 1 7.4.2 质谱条件 离子源：电喷雾离子源。 扫描方式：负离子扫描。 检测方式：多反应监测。 电离电压：1.6kV。 源温：150℃ 雾化温度：500℃ 锥孔气流速：150L/h。 雾化气流速：1000L/h。 其他条件见表2。 表2舒巴坦定性、定量离子对及锥孔电压、碰撞能量的参考值 药物 定性离子对（m/z） 定量离子对（m/z） 锥孔电压（V