血浆血清miRNA提取试剂盒柱式法.doc

血浆（血清）miRNA提取试剂盒（柱式法） 使用说明书（Cat#Yu-Mi01-1） 【产品介绍】 miRNA是一类长约19~24nt的非编码单链小RNA 分子，在动物中绝大多数miRNA 可以通过与靶基因3′UTR 区互补结合，抑制靶基因翻译成蛋白质，进而在细胞、组织或个体水平上影响生物体的生长发育，并参与多种疾病过程。一系列的研究表明miRNA在细胞生长和凋亡、血细胞分化、同源异形盒基因调节、神经元的极性、胰岛素分泌、大脑形态形成、心脏发生、胚胎发育和脂肪代谢等过程中发挥重要作用。 随着血浆（血清）miRNA在临床上的广泛应用，miRNA的提取就显得越来越重要。miRNA在正常人的血液中含量甚微，能否获得高质量的miRNA是进行分子生物学研究的第一步，也是关键的一步，直接影响实验成败。 血浆（血清）miRNA提取试剂盒（柱式法）采用本公司的专利技术，有效的提高了膜对核酸的吸附效率，可以从少量血浆（血清）、体液中分离纯化出高质量、高浓度的miRNA。本产品性能优良，结果可靠，安全无污染，打破了国外的垄断。 【产品特点】 1. 效率高：本产品操作简便，提取的miRNA质量好浓度高，提取效率可与国外同类产品相媲美（图1）。结合本公司的Taqman-MGB探针荧光定量PCR试剂盒（Cat#Yu-R01-1）和miRNA逆转录试剂盒（Cat#Yu-RR01-1），可获得完美的miRNA检测效果。 2、提取的核酸可直接用于PCR扩增、分子杂交和测序（NGS）等各种分子生物学实验。 3、本产品适用于从人或动物血浆（血清）、体液中提取纯化miRNA。 4、本产品无氯仿、苯等OSHA规定的危险物品，安全无化学污染。 图1 本产品提取的血浆miRNA浓度分析结果与Qiagen miRNA提取试剂的比较 【所需仪器】台式高速冷冻离心机 【试剂盒组成】 试剂盒组成 数量 保存条件 裂解吸附液A 14mL×1瓶 室温避光保存 Buffer AW1 12mL×1瓶 室温避光保存 Buffer AW2 9mL×1瓶 室温保存 蛋白酶K 250μL×1支 -20℃保存 Carrier RNA 50μL×1支 -20℃保存 洗脱液A 3ml×1瓶 室温保存 吸附柱 50支 4℃保存 套管 100支 使用说明书 1份 【规格】50T/盒 【贮藏与有效期】 裂解吸附液A、Buffer AW1必须室温避光保存（15-25℃）；蛋白酶K和Carrier RNA-20℃保存；吸附柱4℃保存；其它试剂室温保存；有效期为1年。 【自备试剂】无水乙醇，异丙醇 【注意事项】 使用前务必认真阅读以下注意事项。 1、Buffer AW1使用前，加入18mL无水乙醇，混匀，使乙醇含量为60%。★ 2、Buffer AW2使用前，加入21mL无水乙醇，使乙醇含量为70%。 3、提高洗脱温度或重复洗脱可以提高产量。洗脱液使用量太少会影响洗脱效果，20μl洗脱量可以保证75%的核酸被洗脱，两次洗脱可以提高20-30%的产量。★ 【操作步骤】 1、裂解吸附液B的配制：使用前按标本数吸取相应体积的裂解吸附液A，血浆（血清）样本按每280μL裂解吸附液A中加入5μL 蛋白酶K和1μL Carrier RNA，混匀，配成裂解吸附液B。 2、样本处理：取新鲜EDTA抗凝血（已析出血清的不抗凝血或体液），1900×g离心10分钟，吸取上清；上清16,000×g离心10分钟。 3、取140μL样品加入285μL裂解吸附液B，混匀后瞬时离心，60℃静置10min。 4、加入280μL异丙醇，充分混匀，室温静置5min。 5、吸取全部混合液转移至装在2mL收集管的吸附柱中，盖上盖子，8000×g室温离心1分钟，倒掉收集管中的废液。 注：转移液体时，避免液体接触吸附柱的管口。 6、加入600μL Buffer AW1，盖上盖子，10,000×g室温离心30秒，倒掉收集管中的废液。 注：加入AW1时，避免AW1接触吸附柱的管口。 7、加入600μL Buffer AW2，盖上盖子，10,000×g室温离心30秒，倒掉收集管中的废液。 注：加入AW2时，避免AW2接触吸附柱的管口。 8、加入600 μL 无水乙醇，盖上盖子，10,000×g室温离心30秒，丢弃收集管及废液。 注：加入无水乙醇时，避免无水乙醇接触吸附柱的管口。 9、将吸附柱转入新的1.5mL EP中，20,000×g室温开盖离心3分钟，丢弃收集管及废液。 10、将吸附柱转入新的1.5mL EP中，加入至少20μL洗脱液A至吸附柱中心，室温静置3分钟，14,000×g离心1分钟，收集洗脱液，备用（将收集的洗脱液重新加入到吸附柱中，重复步骤10可以增加20%的RNA产量）。