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- 2019-08-05 发布于江苏
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蛋白质的定性测定
考马斯亮蓝法
该染料和蛋白质是通过范德华力结合的。考马斯亮蓝含有较多疏水集团,和蛋白质的疏水区有较大的亲和力,和凝胶基质的亲和力不如氨基黑,所以用考马斯亮蓝染色是漂洗要容易的多。
原理:考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。
蛋白质的定量测定
常量凯氏定氮法
原理:样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出,而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏,使氨蒸出。
①用H3BO3吸收后再以标准HCl溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。
②也可以用过量的标准H2SO4或标准HCl溶液吸收后再以标准NaOH滴定过量的酸。
消化 总反应式:
2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4(98%)=(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2O
浓H2SO4脱水性: 有机物脱水被炭化→C、H、N
浓H2SO4氧化性: 2H2SO4+C=2SO2+2H2O+CO2↑
SO2+N(含氮化合物)→ NH3+ SO3
SO3+H2O=H2SO4
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