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實驗四 蛋白質與胺基酸的呈色反應
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生物化學實驗報告?
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班級:食科系2-1?
姓名:邱冠綾?
學號:0951406011?
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???實驗四
蛋白質與胺基酸的呈色反應??
實驗結果紀錄
?
樣品
Ninhydrin反應
Biuret反應
Sakaguchi試驗
蛋白質
egg albumin
?色
紫色
紅色
?
casein
透明
淡?色
深紫色
?
gelatin
淡紫色
淡紫色
紅棕色
?
soy protein isolate
?
?
?
胺基酸
tyrosine
?
?
?
?
tryptophan
黑紫色
淡?色
深褐色
?
phenylalanine
深紫色
淡?色
?橘色
?
cysteine
?
?
?
?
arginine
深紫色
淡?色
紅色
?
Glutamic acid
紫色
淡綠色
濕灰色
?
proline
深紫色
紅棕色
深褐色
?
histidine
深紫色
淡?色
深紫色
對照
蒸餾水
透明
淡?色
深紫色
?
未知樣品
透明
淡?色
淡紫色
?
思考?:
綜合分析、對比蛋白質和胺基酸各種鑑定方法的特點和用途。
/doc/1125933.html (一)茚三酮反應(Ninhydrin Reaction) ?
α-氨基酸與水化茚三酮(苯丙環三酮戊烴)作用時,產生?色反應,由於蛋白質是由許多α-氨基酸組成的,所以也呈此顏色反應。蛋白質、多肽和各種胺基酸具有茚三酮反應。除無α-胺基的脯氨酸和羟脯胺酸成黃色外,其他胺基酸生成紫紅色,最終為?色化合物。除蛋白質、多肽和各種胺基酸能進行茚三酮反應外,氨、β-丙胺酸和許多一級胺都呈正反應。尿素、馬尿酸、三酮吡秦和肽鍵上的亞胺基呈負反應。現已廣泛地用於胺基酸定量測定。
?
(二)雙縮脲反應(Biuret ) ?
蛋白質在鹼性溶液中與硫酸銅作用呈現紫紅色,稱雙縮脲反應。凡分子中含有兩個以上-CO-NH-键的化合物都呈此反應,蛋白質分子中氨基酸是以肽键相连,因此,所有蛋白質都能與雙缩脲試劑發生反應。凡分子中含有兩個以上-CO-NH-鍵的化合物都呈此反應,蛋白質分子中氨基酸是以肽鍵相連,因此,所有蛋白質都能與雙縮脲試劑發生反應。可以用雙縮脲試劑鑑定蛋白質的存在。?
(三) Sakaguchi試驗(坂口試驗)
在次溴酸鈉或次氯酸鈉存在的條件下,許多含有胍基的化合物(如胍乙酸、甲胍、胍基丁胺等)能與α-萘酚發生反應生成紅色物質。在20種氨基酸中唯有精氨酸含有胍基,所以只有它呈正反應。因此常用於定量測定精氨酸的含量和定性鑑定含有精氨酸的蛋白質。?
如果蛋白質水解作用一直進行到雙縮脲反應呈陰性結果,能對此作何結論?
雙縮脲是由2分子尿素失去1分子氨後的縮合產物,多肽分子中含有許多和雙縮脲架構相似的肽鍵。因此在蛋白質溶液中加入鹼和少量的硫酸銅就有紫紅色銅的絡合物生成。任何蛋白質或蛋白質水解中間產物都有雙縮脲反應。這個性質的顯示與蛋白質分子中所含肽鍵的數目有一定關係。肽鍵數目越多,顏色越深。它能顯色是由於生成了2價銅的絡合物。?
茚三酮反應的陽性結果是否經常是同一色??若不是,為什麼?
蛋白質和胺基酸一樣,也能和茚三酮水合物試劑產生 /doc/1125933.html 紫色的顏色反應,用這個反應可用來鑑別蛋白質。除了水會呈陰性反應。而無α-胺基的脯氨酸和羟脯胺酸成黃色。因為他們沒有α-氨基酸可以與水合茚三酮反應生成?紫色物質。
是否所有的胺基酸都呈現黃色反應的陽性結果,為什麼?是否大部分蛋白質呈現陽性結果,為什麼?
某些蛋白質跟濃硝酸作用時呈黃色,如再以氨處理又變成橙色。有這種反應的蛋白質分子一般都存有苯環。皮膚、指甲、頭髮等遇濃硝酸變黃即為這一反應的結果。
實驗五
胺基酸的分離與鑑定---濾紙色層分析法?
?
實驗紀錄
(1)實驗結果
??
樣品
移動的距離(公分)
Rf值
溶劑
?
?
2.8
0.40
5.4
0.77
4.1
0.59
4.1
0.59
4.7
0.67
2.8
0.40
3.6
0.51
2.7
0.39
3
0.43
未知液
2.8
0.40
(2) 比對未知樣品的Rf值,並推測未知液中可能有哪幾種胺基酸??
??
?????
答
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