六叶绿体中色素的提取与分离.DOC

实验六 叶绿体中色素的提取与分离 ·实验指导（攻关不畏难） 目的要求： 初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。 探索叶绿体中有几种色素。 材料用具： 新鲜的绿色叶片（如菠菜叶片）。干燥的定性滤纸，烧杯（100ML），研钵，小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管，培养皿，药勺，量筒（10ML），天平。丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。 实验原理： 叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以，可以用丙酮提取叶绿体中的色素。 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体中的色素在层析液中的深解度不同：深解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。这样，几分之后，叶结体中的色素就在扩散中分离开来。 方法步骤： （1）称取5克绿色叶片并剪碎 充分研磨 漏斗过滤 色素 （2）加入少许SiO2、CaCO3和5的丙酮 滤液收集到试管并棉塞封口 将干燥处理过的定性滤纸剪成长6㎝、宽1㎝的滤纸条，并在一端剪去两角； 干燥处理，重复2——3次。 用毛细吸管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地画一条滤液线。 干燥处理，重复画2——3次。 将3ML层析液倒入烧杯。 将滤纸条略微斜靠烧杯内壁（有滤液细线的一端朝下），轻轻插入层析液中。 用培养皿盖盖上烧杯。 滤纸条上出现四条宽度，颜色不同的色素带，从上到下依次是：橙黄色的胡萝卜素、黄色的叶黄素、蓝绿色的叶绿素a、黄绿色的叶绿素b 1、选材时要注意选取新鲜、颜色深的叶片。 2、用丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨时要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，减少有机溶剂的挥发。 3、在研磨时加入少许SiO2，目的是为了研磨得充分；加入少许CaCO3的目的是为了防止研磨时叶绿体中色素受到破坏；加入丙酮的目的是作为叶绿体中色素的溶剂。 4、在制备滤纸条时，要剪去两角，这是为了使色素带整齐；要在距离去两角的一端1㎝处画一铅笔细线，其目的是起标记作用，以便使每次重复画的滤液细线在同一位置，画滤液细线要重复2——3次，是为了增加色素的含量，使实验交得明显。 5、分离色素时，一是不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解于层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。 ·实践检验（温故能知新） 1、在叶绿体色素的提取和分离实验中在滤纸条上扩散速度最快的色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素 2、叶绿体中色素的提取和分离的实验目的是（ ） A、观察多种色素的吸收光谱曲 B、验证叶绿体中色素的种类和多种色素的颜色。 C、提取高等植物叶绿体中的色素 D、用纸层析法将色素进行分离 3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽的一条色素带的颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色 4、在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素分析，会得到近似，同心的四个色素环，排到在最里圈的色素是（ ） A、橙黄色 B、蓝绿色 C、黄色 D、黄绿色 5、将叶绿体色素滤液放在自然光源和三棱镜之间，从棱镜的另一铡，观察连续光谱中明显变暗的区域是（ ） A、红光和蓝紫光区 B、黄光和蓝紫光区 C、红光和绿光区 D、黄光和绿光区 6、下列关于“叶绿体中色素的提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是（ ） A、提取高等植物叶绿体中的色素 B、用纸层析法分离色素 C、了解多种色素的吸收光谱　　　　　 D、验证叶绿体所含色素的种类 二、简答题： 在叶绿体色素的提取和分离实验中： （1）用纸层析法分离叶绿体中四种色素的原理是 。在滤纸上随层析液扩散速度最快的色素是 原因是 。 （2）为了获得整齐又不重复的四条色素带，在划滤液细线时应注意： ；