慢性疼痛基因治疗的研究现状和展望课件.ppt

;今日主题;慢性疼痛的概念与机制;定义; 疼痛反应对于生物体和生存是一把双刃剑，在应激过程中使生物体能够趋利避害，做出保护自身的反应，而当疼痛的程度过强或者其持续时间较长，机体内则将产生一系列反应使机体的内环境发生变化，而不利于正常生存。 ;疼痛治疗的现代观念 疼痛是一种疾病 疼痛永远是恶性的，需要治疗 疼痛是伤害性或潜在组织损伤引起的不愉快感觉，常伴有内分泌、代谢、免疫和精神心理改变 ; 慢性疼痛它不仅给病患者带来了难以忍受的痛苦，同时也给社会的发展和家庭的和谐增添了无形的阻力。已成为危害公共健康一大问题。;慢性疼痛的分类;疼痛传递的感受;;疼痛上传通路;内源性镇痛系统; 疼痛的敏化机制;癌症（WHO统计） 全球年新发癌症患者1000万，40%伴有不同程度的疼痛； 60%～90%的晚期癌症患者有不同程度的疼痛，70%以疼痛为主要症状 全世界至少有500万人忍受着癌症疼痛的折磨 我国每年癌症新发病人数约有180万，其中62％伴有疼痛;现有疼痛治疗的局限性 ;神经阻滞;脊髓刺激;虽然使用这些药物和方法确实能产生好的镇痛效果，但伴随而来的是一些令人忧虑的副作用;? ;慢性疼痛的基因治疗的研究;什么是基因治疗？;基因治疗的标靶与范围;基因治疗的起始;基因治疗的研究现状 ;到2005年1月止基因治疗;基因治疗临床方案 ;采用的基因导入系统 目前在基因治疗中所采用的基因转导系统主要有反转录病毒载体、腺病毒载体、裸DNA、脂质体和腺相关病毒载体等，其中腺病毒载体和反转录病毒载体占绝大部分，分别有 260和261个方案采用，而腺相关病毒载体只有27个，可能是由于腺相关病毒的生产仍有待突破。 ;治疗基因选择主要集中于抗体、肿瘤抑制剂和细胞因子三个方面。 ; 基因治疗要取得实质性的突破，必须解决三个关键问题，即基因导入系统、基因表达的可控性及治疗效果明确的治疗基因。;慢性疼痛基因治疗可行吗？; 疼痛基因治疗的策略 ;上调抗痛基因表达;;神经营养因子家族：是一类能够促进特定神经组织细胞分化、再生，刺激神经递质释放并且能改变神经元特性的蛋白分子，包括NT3、NT4、 BDNF、NGF等。主要是通过抑制神经元凋亡和促进阿片肽释放治疗疼痛，适用于神经损伤或中毒导致的慢性神经痛。 免疫调节性细胞因子：IL-2和IL-10。其中前者主要通过类阿片肽作用，后者通过抑制神经组织炎症反应达到镇痛目的。;;β-内啡肽基因治疗实验报导;转基因蛋白定量检测;β-内啡肽基因治疗CCI模型;常用的转基因载体;基因载体系统;优点：1、利用病毒天然的感染性进入细胞，转导效率高； 2、复杂的装配过程由细胞完成； 3、不同的病毒载体具有不同的表达特点。;腺病毒;腺病毒结构;腺病毒基因组示意图;腺病毒转移载体优点;腺病毒载体的缺点及改造;三代腺病毒载体;改造腺病毒基因组;第三代腺病毒生产系统;腺相关病毒;;;单纯疱疹病毒;其他病毒载体;非病毒载体简介;非病毒载体基因治疗;概念 将一些特殊细胞植入到受者的中枢神经系统，通过这些类似于“生物微泵”（bio-minipump）的细胞持续分泌镇痛物质而缓解疼痛或提高痛阈。 ;细胞移植治疗慢性疼痛－方法学;细胞移植治疗慢性疼痛－实践;存在的问题 细胞来源较少、体外培养难以获得较高的细胞浓度、细胞分泌镇痛物质的量及其存活时间和安全性较为有限 解决方法 生物细胞永生化和去永生化技术 建系细胞和基因工程修饰细胞的建立; 是利用基因转移技术将外源性的永生化基因如猿病毒40大T抗原（SV40Tag）转入到靶细胞或稳定整合到靶细胞基因组中，获得稳定表达的转化细胞，从增殖危机中逃逸，从而获得类似癌细胞的无限增殖能力，进而建立永生化细胞株。 ; 在获得具有分裂活性而又无复制衰老的原代永生化细胞后，通过Cre-loxP重组酶系统将两翼“锚定”有loxP序列（LoxP-Flanked）位点的SV40Tag基因定向敲除，使细胞去永生化,从而消除致瘤性，此技术又称为“可塑性永生化”。这一系统意味着可通过这一“基因开关”有目的地控制基因的表达。 ; 采用基因工程修饰技术建立具有表达人脑啡肤的永生化和可诱导去永生化的神经前体细胞系是细胞镇痛中细胞来源的最理想的选择。因其植入受者的蛛网膜下腔具有多分化潜能、较好的稳定性、可控性、安全性以及组织相容性和长时间表达镇痛蛋白的效果。 ;;反义核苷酸;反义核苷酸靶基因;;RNA干扰（RNAi）;神经系统基因治疗转染途径;转基因表达效率和疗效研究;;靶向性启动子和调控元件： 只能在特异的细胞內如神经元内启动基因表达，在外周组织内不表达，以自分泌形式发挥作用。例如人synapsin-1 基因启动子，大鼠特异烯醇