基于锁核苷酸LNA-烟草科技.PDFVIP

2015 年 12 月 烟草科技 Dec. 2015 第48 卷第 12 期 Tobacco Science Technology Vol. 48 No. 12 基于锁核苷酸（LNA）增敏的植烟土壤中烟草 黑胫病菌定量PCR检测方法 1 1 2 1 *1 *1 刘 芳 ，宋纪真 ，范艺宽 ，牟文君 ，奚家勤 ，胡利伟 1. 中国烟草总公司郑州烟草研究院，郑州高新技术产业开发区枫杨街2 号 450001 2. 中国烟草总公司河南省公司，郑州市政七街7 号 450008 摘要：为了快速有效地检测植烟土壤中的烟草黑胫病菌的定殖数量，以一种锁核苷酸（LNA ）引物为 基础，进行了植烟土壤中烟草黑胫病菌数量的定量PCR 检测方法研究。结果表明：①与普通DNA 引物相比，LNA 引物提高了PCR 反应的退火温度，减少了引物二聚体和非特异性产物的形成，提高 了烟草黑胫病菌分子检测的灵敏度与特异性；②定量分析检测出14 个烟草- 大蒜轮作土样中烟草 3 4 黑胫病菌的定殖数量为2.76×10 ～5.20×10 个/g ，且在4 ～5 h 内完成检测，具有较高的灵敏度和检测 效率。 关键词：植烟土壤；烟草黑胫病菌；锁核苷酸（LNA ）；荧光定量PCR ；分子检测 中图分类号：S43 文献标志码：A 文章编号：1002-0861 （2015 ）12-0014-06 DOI: 10.16135/j.issn 1002-0861 AQuantitativePCRMethodforDetectingPhytophthora parasitica var. nicotianae inTobaccoPlantingSoilBasedonLNASensitization 1 1 2 1 * 1 * 1 LIU Fang , SONG Jizhen , FAN Yikuan , MOU Wenjun , XI Jiaqin , and HU Liwei 1. Zhengzhou Tobacco Research Institute of CNTC, Zhengzhou 450001, China 2. Henan Province Company of CNTC, Zhengzhou 450008, China Abstract: In order to efficiently detect the colonization of Phytophthora parasitica var. nicotianae in tobacco planting soil, a quantitative PCR method was researched based on locked nucleic acid （LNA ） primer. The results showed that: 1）Comparing with conventional DNA primers, the LNA primer raised PCR reaction annealing temperature, reduced the formation of primer dimers and non-specific products, and improved the sensitivity and specificity of detection. 2 ）LNA quantitative PCR analysis revealed that the concentration of Phytophthoraparasitica var. nicotianae in 14