动物细胞合和单克隆抗体.pptVIP

B淋巴细胞特点 大量生产单克隆抗体思路 B淋巴细胞具产生抗体的功能 骨髓瘤细胞具无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A．经过免疫的B淋巴细胞 B．不经过免疫的T淋巴细胞 C．经过免疫的T淋巴细胞 D．不经过免疫的B淋巴细胞 * * 黄为波 福州永泰 1970年科学家用发绿色荧光的染料标记小鼠细胞表面的蛋白质分子，用发红色荧光的染料标记人细胞表面的蛋白质分子，将小鼠细胞和人细胞融合。这两种细胞刚融合时，融合细胞一半发绿色荧光，另一半发红色荧光，在37*C下经40min,两种颜色的荧光均匀分布。 植物体细胞杂交 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 原生质 体融合 杂种细胞 组织培养 杂种植株 去细胞壁 纤维素酶、果胶酶 化学法 物理法 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 2个完整的杂交细胞AB 有丝分裂 （膜融合、 诱导方法 质融合、 核融合） 融合细胞 动物细胞融合过程： 1.诱导融合的方法： 　 2.动物细胞融合的原理： 3.动物细胞融合基本过程是： 生物方法：灭活的病毒。 化学物质：如：聚乙二醇 物理方法：离心、振动、电激等  细胞膜的流动性 分散成单个细胞 后诱导细胞融合 动物细胞融合 制备单克隆抗体 4.动物细胞融合最重要的用途是： 形成杂交细胞 获得杂种植株 结果 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原 理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较 方法步骤 酶解法去除细胞壁后诱导原生质体融合，形成杂种细胞后培养成杂种植株 分散成单个细胞后诱导细胞融合 二、单克隆抗体 抗体的传统生产方法及缺陷是什么？ 传统制备抗体的缺陷： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差。 思 考：为什么有这些缺陷，B淋巴细胞有什么特点？ ３．每一个B淋巴细胞只能产生一种特异性抗体。 １．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以 产生抗体。 ２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体 1、概念: B淋巴细胞 （效应B细胞） 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 克隆上述杂交瘤细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 2、单克隆抗体的制备过程 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。 杂交瘤细胞有何特点？ 特异性强，灵敏度高且可大量制备 根据以下信息，设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中筛选出杂交瘤细胞。已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。淋巴细胞中有这2种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。 思考 方法: 将这2种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，然后在培养液中加入氨基喋呤。  由题意可知，细胞融合后的杂交瘤细胞合成DNA有D和S两条途径，且可在培养基上无限增殖。在培养基内加入氨基喋呤，骨髓瘤细胞由于只有D途径合成DNA，无法增殖，将其去除，剩下淋巴细胞和杂交瘤细胞，继续培养，由于淋巴细胞不能无限增殖，培养一段时间后，自然去除，只剩下杂交瘤细胞，正是我们想得到的结果。 原理分析： 3.单克隆抗体的应用： ①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速 ②用于 运载药物：制成“生物导弹” 治疗疾病：主要用于癌症治疗 “生物导弹”＝单克隆抗体＋药物 A 2、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是（ ） A．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B淋巴细胞 B．用纤维素酶处理B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞 C．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细