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Calbiochem® FragEL™ DNA Fragmentation Detection Kit, Fluorescent-TdT Enzyme 目录货号目录货号QIA39 目录货号目录货号 背景介绍背景介绍：： 背景介绍背景介绍：： 细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在生物体进化、内环境的稳定以及系统发育中发挥着 重要的作用。细胞凋亡发生在正常的细胞周期循环中，并发生形态学和生理生化的特征性改变，比 如细胞皱缩，细胞间连接消失，线粒体膜电位消失，通透性改变，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA 降解成为约 180bp-200bp 的片段；胞膜有小泡状突起，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，胞膜结 构仍保持完整，最终凋亡细胞遗骸被分割包裹为几个凋亡小体，并迅速被周围专职或非专职吞噬细 胞吞噬。以上改变发生在不同的细胞凋亡阶段。 检测原理检测原理：： 检测原理检测原理：： 在凋亡晚期细胞中，DNA 会被降解为不同大小的片段，正常的或正在增殖的细胞则几乎没有 DNA 的断裂，该方法是将荧光素 （Fluorescein ）标记和未标记的dNTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移 酶（TdT 酶）的作用下，连接到凋亡细胞中断裂DNA 片段的3’-OH 末端，然后进行荧光显微镜或 流式细胞仪检测。试剂盒对标记反应进行了优化试剂盒对标记反应进行了优化，采用最佳比例的荧光素标记和未标记的，采用最佳比例的荧光素标记和未标记的 dNTP 进进 试剂盒对标记反应进行了优化试剂盒对标记反应进行了优化，，采用最佳比例的荧光素标记和未标记的采用最佳比例的荧光素标记和未标记的 进进 行行 3’-OH 末端的核苷酸掺入末端的核苷酸掺入，使得同一个断裂的，使得同一个断裂的 DNA 片段片段末端可以形成更长的末端可以形成更长的 “标记尾巴“标记尾巴”，”，该该 行行 末端的核苷酸掺入末端的核苷酸掺入，，使得同一个断裂的使得同一个断裂的 片段片段末端可以形成更长的末端可以形成更长的 ““标记尾巴标记尾巴””，，该该 “标记尾巴“标记尾巴”减少了相邻掺入”减少了相邻掺入 dNTP 上标记基团的空间位阻上标记基团的空间位阻，增加每个断裂片段后的荧光基团数目，增加每个断裂片段后的荧光基团数目，， ““标记尾巴标记尾巴””减少了相邻掺入减少了相邻掺入 上标记基团的空间位阻上标记基团的空间位阻，，增加每个断裂片段后的荧光基团数目增加每个断裂片段后的荧光基团数目，， 降低荧光基团相邻后可能造成的降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭聚集和淬灭，从而提高检测灵敏度，从而提高检测灵敏度，减少非特异性反应，减少非特异性反应。此外。 试剂 降低荧光基团相邻后可能造成的降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭聚集和淬灭，，从而提高检测灵敏度从而提高检测灵敏度，，减少非特异性反应减少非特异性反应。。 盒提供的封片剂中含有DAPI 核染料，可以将全部标记和未标记细胞的 DNA 着色，并在 330-380nm 波长激发光下发出荧光，从而得以判断凋亡细胞占总细胞比例。封片剂还可以稳定和增强荧光信号， 减少淬灭，从而提高检测的灵敏度。 检测次数检测次数：：50 次 检测次数检测次数：： 检测方法检测方法：：荧光显微镜或流式细胞仪 检测方法检测方法：： 样本类型样本类型：：石蜡包埋组织切片、组织冰冻切片、细胞涂片以及细胞悬液 样本类型样本类型：： 种属反应种属反应：一：一系列不同种属 种属反应种属反应：：一一 储存与运输条件储存与运输条件：：试剂盒需用干冰运输并储存在-20℃非无霜冰箱中 储存与运输条件储存与运输条件：： 默克生命科学服务热线默克生命科学服务热线：：400-820-8872 邮箱邮箱：：bioteam@ 1 默克生命科学服务热线默克生命科学服务热线：： 邮箱邮箱：： 图 1. 试剂盒检测原理图 试剂盒组分试剂盒组分：： 试剂盒组分试剂盒组分：： （1）蛋白酶K （PROTEINASE K ）：用来消化细胞，增加样本的通透性。 （2 ）5 ×T