2.2.1动物细胞养和核移植技术.pptVIP

2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体等 动物细胞工程常用的技术 动物细胞培养 动物细胞核移植技术 动物细胞融合 是其他动物细胞工程技术的基础 什么是动物细胞培养? 一.动物细胞培养 如何进行细胞培养? 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 (一)概念 主要是蛋白质；用胃蛋白酶不行，胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去，为什么？ 取幼龄动物的组织、器官或动物胚胎 因为这些细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 转入培养液中进行原代培养 称为细胞的接触抑制 将动物组织消化后的初次培养称为原代培养 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常被称为传代培养。 因为一般来说，细胞传至10-50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，此时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。当继续传代培养时，少部分细胞会客服细胞寿命的自然极限，获得不死性，发生突变，朝着等同于癌细胞的方向发展。 因此，目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。 (二) 过程 用培养液稀释 1、无菌、无毒的环境 (三) 动物细胞培养的条件 对培养液和所有培养用具进行无菌处理 添加一定量的抗生素，防止污染 定期更换培养液，以便清除代谢产物 2、营养（合成培养基） 葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子、动物血清、血浆等 补充合成培养基中缺乏的物质，保证细胞能够顺利生长和增殖。 3、温度和PH (三) 动物细胞培养的条件 细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近 哺乳动物多以36.5 +0.5度 为宜 多数细胞生存的适宜PH为7.2-7.4 4、气体环境 是细胞代谢所必需 O2和CO2 主要是维持培养液的PH 通常采用培养皿或松盖培养瓶，将其置于含95%空气加5%CO2的混合气体的培养箱中进行培养。 1、生产具有重要价值的生物制品。 2、为基因工程提供受体细胞。 3、用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。 4、用于生理、病理、药理等方面的研究。 (四) 动物细胞培养技术的应用 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 细胞悬液 传代培养 单个细胞 取幼龄动物的组织、器官或动物胚胎（取材） 用培养液稀释 原代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎组织 过程 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 分 类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 (一)、 动物细胞核移植概念： (二)、体细胞核移植的过程： 为什么用MⅡ中期卵母细胞做核移植的受体细胞？ 卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现全能性的物质。 为什么要先去掉受体卵母细胞的核？ 为了使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞（供体细胞） 过程 供体体细胞 细胞培养 供体细胞 卵巢卵母细胞 去核 去核卵母细胞 重组胚胎 代孕母体 生出与供体遗传物质基本相同的个体 减Ⅱ中期 注入 细胞融合 胚胎移植 (三)、体细胞核移植技术的应用前景： 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程，促进优良畜群繁育。 2、保护濒危物种，增加濒危物种的存活数量 3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植供体 4、了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病 (四)、体细胞核移植技术存在的问题： 1.成功率非常低 2. 许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，免疫失调等 3、克隆动物食品的安全性问题 动物细胞培养 植物组织培养 植物细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体或组织 获得细胞 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 液体培养基 固体培养基 细胞增殖 培养结果 培养目的 培养基特有成分 培养基性质 原理 P49讨论： 1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部 来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在 供体细胞的细胞核