外植体及消毒.pptVIP

（3）培养基成分 初代培养时，培养基中无机盐浓度过高可引酚类化合物的大量产生，导致外植体褐变。液体培养基可有效克服外植体褐变； 在培养基中加入一些抗氧化物和其他抑制剂，如盐酸半胱氨酸，抗坏血酸，硫代硫酸钠或柠檬酸等； 在培养基中加入0.5%-1%的活性炭，用以吸附褐变产生的有害物质，从而减轻褐变。 （4）培养条件 光照：采取外植体前，如果将材料或母株进行遮光处理，然后再切取外植体，能有效抑制褐化。无光抑制褐化原理是由于在氧化过程中，许多反应受酶系统控制，而酶系统活性受光照影响。 温度：高温促进酚氧化，而低温抑制酚类化合物氧化，降低多酚氧化酶活性，从而减轻褐化。 （5）材料继代时间 将培养物不断转移到新鲜培养基上，以消除有害物质的累积造成的危害。如初代培养后，发现有较严重褐化现象，可及时将其继代至新鲜培养基中。 定义：植物材料离体繁殖时，有些培养基的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。 叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷曲； 叶表缺少角质层蜡质，没有功能性气孔； 体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低； 吸收营养与光合功能不全，分化能力大大降低，苗生长缓慢、繁殖系数大为降低，甚至死亡； 生根困难，移栽成活率低。 大大降低了试管苗有效增殖系数，严重影响了试管苗质量，造成人、财、物的极大浪费，必须对玻璃化加以控制。 组织培养过程中的环境变化引起，导致玻璃化的因素有以下几方面：　　 （1）激素浓度（尤其CTK）增加或CTK╱IAA高　 （2）琼脂浓度 　　　　　　　　 （3）光照　　　　　　　 （4）温度　　　　　　　　　　　 （5）湿度　　　　　　 （6）培养基离子种类及比例不适宜 （7）继代次数 （1）、激素浓度（尤其CTK）增加或CTK╱IAA高 高浓度的细胞分裂素有利于促进芽的分化，也会使玻璃化的发生比例提高。 细胞分裂素与生长素的比例失调，细胞分裂素的含量显著高于两者之间的适宜比例时，使组培苗正常生长所需的激素水平失衡，导致玻璃化的产生 （2）琼脂浓度 随琼脂浓度的增加，玻璃化的比例明显较少，但过多时培养基太硬，影响养分的吸收，使苗的生长速度减慢。 （3）光照　 增加光照强度或时间可以促进光合作用、 提高碳水化合物的含量，使玻璃化的发生比例降低。光照不足再加上高温，极易引起组培苗的过度生长，加速玻璃化发生。 （4）温度　 温度主要影响苗的生长速度，温度升高时，苗的生长速度明显加快，高温达到一定限度后，会对正常生长和代谢产生不良影响，促进玻璃化的产生。 （5）湿度 瓶内湿度与通气条件密切相关，使用有通气孔的膜或通气较好的滤纸、牛皮纸封口时，玻璃化发生率减少。如果用瓶盖、不透气的封口膜、锡箔纸封口时，不利于气体交换，瓶子内处于不透气的高温条件下，苗的生长势快，玻璃化的发生频率相对较高。 变温培养时，温度变化幅度大，忽高忽低的温度变化容易在瓶内壁形成小水滴，增加容器内湿度，提高玻璃化发生率。 （6）培养基离子种类及比例不适宜 培养基中的各种矿质营养，对促进培养物的生长和发育有积极的作用，但是个营养物之间存在平衡。一般来讲，提高培养基的碳氮比，可以减少玻璃化的比例。 （7）继代次数 随着继代次数的增加，愈伤组织和试管苗体内积累过量的细胞分裂素，玻璃化程度不断升高。继代培养最初几代玻璃化苗很少，随着继代次数的增加，玻璃化苗的比例越来越高。特别是香石竹、非洲菊等植物材料。 降低培养基的含水量 减少培养基中含氮化合物的用量 增加光照强度 降低培养基中细胞分裂素的含量 尽量控制继代次数 。。。。。。。 灭菌和消毒有何差别？为什么？ 常用的灭菌方法各有哪些优缺点？ 采用高压蒸汽锅高压灭菌时，应注意哪些事项？ 实验人员进入接种室接种之前，应做哪些准备工作？ 接种的植物材料如何进行预处理？如何接种？ 组织培养中，怎样尽量避免出现褐变和玻璃化苗？ 1 2 3 4 5 6 在选择一种消毒剂时，首先要了解消毒剂的性质，但同时又应认识到没有一种消毒剂是完全理想的。细菌学家建议理想的消毒剂应该具备以下九大特征。 ①能广谱地杀灭微生物； ②对人体无毒； ③无腐蚀性，对设备无污染； ④具有洗涤剂作用； ⑤具有稳定性； ⑥作用迅速； ⑦不因有机物的存在而失去活性； ⑧产生所期望的后效作用； ⑨廉价。 各种试剂都有优点和局限性，应选择一种试剂或几种试剂结合使用，以最低成本获得最大效果。 75％酒精(Alcohol)溶液(体积分数) 酒精渗入细菌体内使细菌蛋白质凝固，而被杀死。 75%效果