三角帆蚌新发现的贝壳基质蛋白基因hic9的分离、鉴定及.PDFVIP

第43 卷 第 4 期 水 产 学 报 Vol. 43, No. 4 2019 年 4 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Apr., 2019 文章编号: 1000-0615(2019)04-0782-08 DOI: 10.11964/jfc.20171111020 三角帆蚌新发现的贝壳基质蛋白基因hic9的分离、鉴定及 其在珍珠早期形成过程中的作用 1,2,3 1 1 1 1,4* 刘晓军 ， 郭 炜 ， 金 参 ， 白志毅， 李家乐 (1. 上海洋大学，农业农村部淡水水产种质资源重点实验室，上海 201306 ； 2. 上海洋大学，水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306 ； 3. 上海洋大学，水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海 201306 ； 4. 上海海洋大学E研究院，上海 201306) 摘要：为进一步研究珍珠质形成的分子机理，使用RACE-PCR技术从三角帆蚌外套膜中 克隆到一个新的贝壳基质蛋白基因hic9 。RT-PCR和原位杂交技术结果显示，hic9主要在 闭壳肌和外套膜中表达，且在外套膜外褶的外表皮各部分都有信号，在壳皮沟中同样有 信号，这些结果表明，hic9是一个同时参与了贝壳角质层、棱柱层和珍珠层形成的多功 能基质蛋白基因。hic9 富含甘氨酸(14.81%)、脯氨酸(13.58%)和丙氨酸(12.35%) ，在序列 中部形成“Gly-X-X” 的结构(X为任意氨基酸) ，与近C末端连续重复丙氨酸结构(polyA)一 起使hic9具有类似蛛丝蛋白的结构特征。hic9 C 末端由一段疏水性序列“LAWMLFV” 组 成，推测这段序列形成β折叠结构，紧邻该序列89~91位是“Asp-Leu -Asp” 序列，这是一 个典型的Ca2+ 结合位点。此外，通过实时定量PCR检测了珍珠形成早期阶段hic9在初生珍 珠囊中的表达情况，插片后3~15 d hic9在珍珠囊中的表达水平维持在大致相同的表达水 平，在碳酸钙沉积物从无序向有序转变时期(18~25 d) ，表达水平较第15天有显著的升 高，这表明hic9参与了这一过程，在珍珠层的形成过程中发挥了关键作用。 关键词: 三角帆蚌；生物矿化；贝壳基质蛋白；珍珠层；珍珠 中图分类号: Q 786 ；S 966.22 文献标志码: A 自然界在进化演变进程中，软体动物从外 酸钙晶体大约占其体积的95% ，而几丁质、蛋白 [3] 界水环境中摄取无机离子，并在有机大分子的 质等生物大分子仅占5%左右 。尽管贝壳有机基 严格调控下，经历核化、生长和变相等步骤， 质中还含有多糖及脂类，但主要是蛋白质，对 最终形成了结构高度有序且机械性能优异的贝 碳酸钙生物矿化起调控作用的也主要是这些蛋 [1] 白，被总称为基质