乙二醇缩水甘油醚交联海藻酸钠.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（１２）：７７８３ 乙二醇缩水甘油醚交联海藻酸钠羧甲基 纤维素钠固定化脂肪酶 １ １ ４ ２，３ ２，３ ２，３ 徐　珊 　李任强 　张继福 　张　云 　孙爱君 　胡云峰 （１暨南大学生物工程学系　广州　５１０６３２　２中国科学院南海海洋研究所　广东省海洋药物重点实验室　广州　５１０３０１） （３中国科学院南海海洋研究所　中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室　广州　５１０３０１　４广东省中医院　广州　５１０１２０） 摘要　以海藻酸钠、羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ）为载体，分别以乙二醇缩水甘油醚（ＥＧＤＥ）和戊二醛 为交联剂，采用包埋交联法对脂肪酶进行固定化，结果显示ＥＧＤＥ的交联效果要优于戊二醛，添 加ＥＧＤＥ的固定化酶酶活最好。得到制备固定化酶的最优方案为海藻酸钠２．５％，ＣＭＣ浓度 １．５％，给酶量８００Ｕ／ｍｌ复配载体，氯化钙５％，以０．０２％的ＥＧＤＥ交联固定３０ｍｉｎ，由此制备得到 酶活约为３８０Ｕ／ｇ的固定化酶，酶活收率约为５０．０９％。固定化酶的最适反应ｐＨ为８．５，比游离 酶增大０．５个单位；最适反应温度是４５℃，比游离酶提高５℃；耐热性能变好，且重复使用７次后 仍能保持６０％左右的相对酶酶活。 关键词　海藻酸钠　羧甲基纤维素钠　乙二醇缩水甘油醚　固定化酶 中图分类号　Ｑ８１９ 　　脂肪酶（ｌｉｐａｓｅ，ＥＣ３．１．１．３）是催化甘油酯水解的 　　酶的固定化方法主要有包埋法、吸附法、交联 一类酶的总称，其催化反应通常都具有底物专一性和 ［１０］ 法 、共价结合法等，其中包埋法不需要化学修饰酶蛋 立体异构专一性，且反应条件较温和，催化效率高，副 白的氨基酸残基，最大程度地保留了酶分子原来的空 ［１］ 产物少 ，被广泛应用到食品、制革、洗涤、制药和环境 间构象，使得经过固定化后的酶分子较大程度地保留 ［２４］ 治理等工业领域 。随着人们对食品安全的越来越 原来的酶学特性，且固定化后的酶活回收率一般都比 重视，脂肪酶作为一种绿色的生物高效产品，正逐渐替 较高［１１１２］。实验常用的固定化载体主要有天然高分子 代一些化学添加剂的使用，如脂肪酶与葡萄糖氧化酶 材料、合成高分子材料、无机载体、复合载体材料，以及 ［５］ 复配使用后可替代化学增筋剂溴酸钾 ，脂肪酶替代 近年来不断开发的新型载体［１３１４］。海藻酸钠是一种较 ［６］ 传统油脂水解时使用的化学催化剂 ，酶制剂代替化 为常用的固定化酶载体，它与氯化钙形成的海藻酸钙 学保鲜剂实现对食品的保鲜储存，脂肪酶作用于乳制 凝胶具有含水率高、成型较容易，清洁无毒等优点，但 ［７］ 品产生短链脂肪酸，可增加其风味 。但由于游离脂 由于其网络孔隙的尺寸较大，凝胶珠机械强度较差，酶 肪酶基本都只能一次性使用，使用过后难以回收利用， 分子易从凝胶孔隙中泄露出来，由其制备得到的固定 使得部分价格较高的脂肪酶难以广泛应用于食品工业 ［１５］ 化酶重复使用率不高 。因此，本文筛选出羧甲基纤 领域。因此，将酶固定于某一载体上，在保持其原先催 维素钠与海藻酸钠进行复配制备固定化凝胶，同时以 化特性的前提下，实现多次重复使用，显得尤为重