酶工程第二章 微生物发酵产酶.pptVIP

第二章 微生物发酵产酶 利用微生物产酶的优点是： 1.微生物种类多、酶种丰富，且菌株易诱变，菌种多样。 2.微生物生长繁殖快，易提取酶，特别是胞外酶。 3.微生物培养基来源广泛、价格便宜。 4.可以采用微电脑等新技术，控制酶发酵生产过程，生产可连续化、自动化，经济效益高。 5.可以利用以基因工程为主的近代分子生物学技术，选育菌种、增加酶产率和开发新酶种。 第一节 酶的生产菌种 目前投入工业发酵生产的酶约有50-60种。 它们的生产菌种十分广泛，包括细菌、放线菌、酵母菌、霉菌。 革兰氏阴性菌——大肠杆菌 大肠杆菌扫描电镜图（分裂） 带有纤毛的大肠杆菌 Escherich属菌株和大多数大肠杆菌是无害，但也有些大肠杆菌是致病的，会引起腹泻和尿路感染。 大肠杆菌的名声主要因它易于在实验室操作、生长迅速，而且营养要求低。 应用： 大肠杆菌能作为宿主供大量的细菌病毒生长繁殖； 大肠杆菌也是最早用作基因工程的宿主菌； 工业上生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶和 制备天冬氨酸、苏氨酸及缬氨酸等。 大肠杆菌可以用于生产多种酶。 大肠杆菌产生的酶一般都属于胞内酶，需要经过细胞破碎才能分离得到。 例如，大肠杆菌谷氨酸脱羧酶，用于测定谷氨酸含量或用于生产γ-氨基丁酸； 大肠杆菌天冬氨酸酶，用于催化延胡索酸加氨生产L－天冬氨酸； 大肠杆菌青霉素酰化酶，用于生产新的半合成青霉素或头孢霉素； 大肠杆菌天冬酰胺酶，对白血病具有显著疗效； 大肠杆菌β-半乳糖苷酶，用于分解乳糖或其他β-半乳糖苷。 采用大肠杆菌生产的限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、核酸外切酶等，在基因工程等方面广泛应用。 2. 枯草杆菌 枯草杆菌（Bacillus subtilis）是芽孢杆菌属细菌。细胞呈杆状，大小为0．7～0.8μm×2～3μm，单个细胞，无荚膜，周生鞭毛，运动，革兰氏染色阳性。芽孢0.6～0.9 μm×1～1.5μm，椭圆至柱状。菌落粗糙，不透明，不闪光，扩张，污白色或微带黄色。 枯草杆菌 枯草芽孢杆菌是应用最广泛的产酶微生物，可以用于生产α-淀粉酶、蛋白酶、β-葡聚糖酶、5′-核苷酸酶和碱性磷酸酶等。 例如，枯草杆菌BF7658是国内用于生产α-淀粉酶的主要菌株； 枯草杆菌AS1．398用于生产中性蛋白酶和碱性磷酸酶； 枯草杆菌生产的α-淀粉酶和蛋白酶等都是胞外酶，而其产生的碱性磷酸酶存在于细胞间质之中。 二、放线菌 放线菌（actmomycetes）是具有分支状菌丝的单细胞原核微生物。常用于酶发酵生产的放线菌主要是链霉菌（Streptomyces）。 链霉菌菌落呈放射状，具有分支的菌丝体，菌丝直径0.2～1.2μm，革兰氏染色阳性。菌丝有气生菌丝和基内菌丝之分，基内菌丝不断裂，只有气生菌丝形成孢子链。 链霉菌是生产葡萄糖异构酶的主要微生物，同时还可以用于生产青霉素酰化酶、 纤维素酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、几丁质酶等。 此外，链霉菌还含有丰富的16α羟化酶，可用于甾体转化。 三、霉菌 霉菌是一类丝状真菌，用于酶的发酵生产的霉菌主要有黑曲霉、米曲霉、红曲霉、青霉、木霉、根霉、毛霉等。 应用： 1.是制酱、酿酒、制醋的主要菌种； 2.是生产酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、果胶酶）的菌种； 3.生产有机酸（如柠檬酸、葡萄糖酸等）； 4.农业上用作生产糖化饲料的菌种。 1.黑曲霉 黑曲霉（Aspergillus niger）是曲霉属黑曲霉群霉菌。菌丝体由具有横隔的分支菌丝构成，菌丛黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子球形，平滑或粗糙。 黑曲酶可用于生产多种酶，有胞外酶也有胞内酶。例如，糖化酶、α-淀粉酶、酸性蛋白酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶、核糖核酸酶、脂肪酶、纤维素酶、橙皮苷酶和柚苷酶等。 黑曲霉 葡萄黑曲霉腐烂病 黑曲霉（可引起烧伤病人皮肤感染或真菌性肺部感染） 2.米曲霉 米曲霉（Aspergillus Oryzae）是曲霉属黄曲霉群霉菌。菌丛一般为黄绿色，后变为黄褐色，分生孢子头呈放射形，顶囊球形或瓶形，小梗一般为单层，分生孢子球形，平滑，少数有刺，分生孢子梗长达2 mm左右，粗糙。 米曲霉 米曲霉中糖化酶和蛋白酶的活力较强，这使米曲霉在我国传统的酒曲和酱油曲的制造中广泛应用。 此外，米曲霉还可以用于生产氨基酰化酶、磷酸二酯酶、果胶酶、核酸酶P等。 3.红曲霉 红曲霉（Monascus）菌落初期白色，老熟后变为