黑视素基因转染给光双极细胞部分恢复MNU诱导的视网膜感光细胞.PDFVIP

中国病理生理杂志　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　２０１３，２９（７）：１１５３１１５９ ·１１５３· ［文章编号］　１０００４７１８（２０１３）０７１１５３０７ ·论　著 · 黑视素基因转染给光双极细胞部分恢复ＭＮＵ诱导的 视网膜感光细胞变性小鼠的视觉 １，２ １，２ ２ ２ １，２△ 熊国吟 ，　罗小鹏 ，　杨癉炎 ，　徐　颖 ，　董　军 １ ２ （暨南大学 医学院病理生理学系，粤港澳中枢神经再生研究院，广东 广州５１０６３２） 　　［摘　要］　目的：探索定向转染内源性光感受蛋白黑视素（ｍｅｌａｎｏｐｓｉｎ／ｏｐｓｉｎ４，Ｏｐｎ４）基因进入给光型双极细 胞后，视网膜变性小鼠模型中视网膜神经元的光反应以及整体视觉行为的改变。方法：选用由甲基亚硝基脲（Ｎ ｍｅｔｈｙｌＮｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ，ＭＮＵ）诱导的成年ＣＤ１小鼠作为视网膜变性模型。于Ｐ０～Ｐ１ＣＤ１乳鼠视网膜底注射 Ｇｒｍ６ Ｏｐｎ４ＧＦＰ质粒，Ｇｒｍ６ＧＦＰ作为阴性对照。通过电转进行基因转染。术后５周对基因转染小鼠腹腔注射 ＭＮＵ诱 导视网膜感光细胞变性，对照组注射生理盐水，共设计５个实验组：正常对照组（ｎｏｒｍａｌ）、生理盐水Ｇｒｍ６Ｏｐｎ４ＧＦＰ 对照组（ＮＳ＋ｍｅｌａｎｏｐｓｉｎ）、ＭＮＵ诱导模型 Ｇｒｍ６Ｏｐｎ４ＧＦＰ治疗组（ＭＮＵ＋ｍｅｌａｎｏｐｓｉｎ）、ＭＮＵ诱导模型 Ｇｒｍ６ＧＦＰ 对照组（ＭＮＵ＋ＧＦＰ）和ＭＮＵ诱导组（ＭＮＵ）。诱导后连续７ｄ进行明暗箱测试，统计动物在暗箱中的活动时间比。 随后进行视网膜电图（ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｍ，ＥＲＧ）测试，计算体现给光双极细胞光反应的ｂ波峰值、潜伏期和反映视网 膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌｓ，ＲＧＣｓ）光反应的明视负波反应（ｐｈｏｔｏｐｉｃｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＰｈＮＲ）。利用免疫荧 光法检测动物视网膜黑视素基因转导效果。结果：黑视素可以被定向转染进入视网膜给光双极细胞。明暗箱实验 显示ＭＮＵ诱导７ｄ后Ｇｒｍ６Ｏｐｎ４ＧＦＰ转染的ＣＤ１小鼠滞留在黑箱的时间显著长于未转染组（Ｐ＜００５），ＥＲＧ测 试显示Ｇｒｍ６Ｏｐｎ４ＧＦＰ转染的ＣＤ１小鼠的ｂ波也有明显恢复（Ｐ＜００５）。结论：定向转染内源性光感受蛋白黑 视素基因进入给光型双极细胞可部分恢复视网膜变性模型动物视觉。 ［关键词］　视网膜变性；黑视素；给光双极细胞；甲基亚硝基脲 　　［中图分类号］　Ｒ３２９．２１　　　　　［文献标志码］　Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００４７１８．２０１３．０７．００１ ＲｅｓｔｏｒａｔｉｏｎｏｆｖｉｓｕａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｅｗｉｔｈＭＮＵｉｎｄｕｃｅｄｒｅｔｉｎａｌｄｅｇｅｎｅ ｒａｔｉｏｎｂｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｅｌａｎｏｐｓｉｎｉｎＯＮｂｉｐｏｌａｒｃｅｌｌｓ １，２ １，２ ２ ２ １，２ ＸＩＯＮＧＧｕｏｙｉｎ ，ＬＵＯＸｉａｏｐｅｎｇ ，ＹＡＮＧＳｈｅｎｇｙａｎ，ＸＵＹｉｎｇ，ＤＯＮＧＪｕｎ １ ２ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＨｏｎｇｋｏｎｇＭａｃａｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣＮＳＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，Ｊｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６３２，Ｃｈｉｎａ．Ｅｍａｉｌ：ｄｏｎｇｊｕｎｂｏｘ＠１６３．ｃｏｍ）