不同培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及酪蛋白表达的.pdfVIP

动物营养学报２０１５，２７（７）：２２４１⁃２２４７ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１５．０７．０３１ 不同培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及 酪蛋白表达的差异 詹　 康　 左晓昕　 贡笑笑　 陈银银　 占今舜　 赵国琦∗ （扬州大学动物科学与技术学院，扬州 ２２５００９） 摘　 要： 本试验旨在研究二维和三维培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及酪蛋白表达的差异。 利用组织块培养细胞来分离奶牛乳腺上皮细胞，利用有限稀释法克隆奶牛乳腺上皮细胞。 通过 显微镜观察细胞在基质胶中的形态，并用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 法检测酪蛋白的诱导表达。 结果表明：１） 采用组织块培养细胞能够成功分离奶牛乳腺上皮细胞，克隆得到的细胞能稳定传至２０ 代。 ２） 细胞接种１２ ｈ之后，二维培养的奶牛乳腺上皮细胞并没有形成明显的细胞簇，细胞间也没有相 互连接；三维培养的奶牛乳腺上皮细胞形成明显的细胞簇，在基质胶内的层黏连蛋白作用下形 成交织网状结构。 培养２ ｄ 细胞间交织网状结构逐渐消失，细胞开始形成单个的成细胞簇，使细 胞间更加紧密的相连。 ３）二维培养奶牛乳腺上皮细胞不能诱导表达酪蛋白，但三维培养细胞可 － 诱导表达κ 酪蛋白。 综上所述，三维培养奶牛乳腺上皮细胞能够改变细胞的形态和功能，诱导 － κ 酪蛋白的表达，三维培养的奶牛乳腺上皮细胞可作为奶牛的泌乳机制研究的体外模型。 关键词： 奶牛乳腺上皮细胞；三维培养；酪蛋白；体外模型 中图分类号：Ｓ８２３　 　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１５）０７⁃２２４１⁃０７ 　 　 三维培养已经成为研究细胞基因表达调控和 分子信号转导受阻，许多功能性基因表达受到抑 － ［１ ５］ 细胞分化一种重要方法 。 因此，三维培养引起 制。 同时，以上试验对酪蛋白的表达都是通过对 ［６］ 国内外研究者的关注。 Ｗａｎｇ 等 利用精氨酸来 ｍＲＮＡ水平检测进行验证的。 在二维培养的模式 刺激奶牛乳腺上皮细胞研究中发现，精氨酸水平 下，酪蛋白的ｍＲＮＡ可能已经降解了，最终导致酪 － 在５５６ ｍｇ／ Ｌ 时κ 酪蛋白ｍＲＮＡ表达量最高。 田 蛋白ｍＲＮＡ不能翻译成具有功能活性的酪蛋白。 ［７］ 青等 在利用胰岛素对奶牛乳腺上皮细胞酪蛋白 原因在于基因转录成 ｍＲＮＡ 之后有许多内部的 合成调节机理的研究中发现，胰岛素能够促进奶 ｍＲＮＡ水平的调控，如ｍＲＮＡ 的转录速率、ｍＲＮＡ － 牛乳腺上皮细胞中αＳ１ 酪蛋白的基因表达。 李 运输、ｍＲＮＡ 稳定性、ｍＲＮＡ 定位、ｍＲＮＡ 翻译调 ［８］ 文清等 用不同培养方法来研究奶牛乳腺上皮细 控。 因此，通过荧光定量 ＰＣＲ 来检测酪蛋白的 － 胞中β 酪蛋白ｍＲＮＡ 表达，胰岛素样生长因子 １ ｍＲＮＡ 丰度显然不能够准确反映酪蛋白真正表达 － （ＩＧＦ⁃１）能够促进 β 酪蛋白ｍＲＮＡ 的表达。 但是 量。 本试验旨在通过三维培养奶牛乳腺上皮细胞 以上试验进行奶牛乳腺上皮细胞培养都是以二维 诱导酪蛋白的表达，并在体外建立奶牛泌乳模型， 培养的方式进行，这样会导致细胞去分化，细胞间 为研究奶牛泌乳机制提供科学的细胞模型。 － － 收稿日期：２０１５ ０１