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人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PL-A2)酶联免疫吸附测定 试剂盒使用说明书 产品编号：E0867h 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA 法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中Lp-PL-A2 含量。 实验原理 用纯化的Lp-PL-A2 抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、 生物素化的Lp-PL-A2 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB 在过 氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 Lp-PL-A2 呈正相关。用酶标 在450nm 波长下测定吸光度（ 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1、 酶标板：一块（96 孔） 2、 标准品 （冻干品）： 2 瓶，请临用前 15 分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至 1ml，盖 好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为6,000 pg/ml，然后 做系列倍比稀释 （注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成6,000 pg/ml，3,000 pg/ml，1,500 pg/ml，750 pg/ml，375 pg/ml，187.5 pg/ml，93.75 pg/ml，样品稀释 液直接作为空白孔 0 pg/ml。如配制3,000 pg/ml 标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ） 6,000 pg/ml 的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf 管中，混匀即可，其 余浓度以此类推。 3、 样品稀释液：1×20ml。 4、 检测稀释液A：1×10ml。 5、 检测稀释液B：1×10ml。 6、 检测溶液 A：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释（如：10 检 测溶液A / 990 检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总 量配制 （100 /孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。 7、 检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）。临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检 测溶液A。 8、 底物溶液：1×10ml/瓶。 9、 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10、终止液：1×10ml/瓶（2 mol/L H SO ）。 2 4 11、覆膜：5 张 12、使用说明书：1 份 自备物品 1、 酶标仪（建议 器使用前提前预热） 2、 微量加液器及吸头，EP 管 3、 蒸馏水或去离子水，滤纸 标本的采集及保存 1、 血清：全血标本请于室温放置2 小时或4 过夜后于 1000 g 离心20 分钟，取上清即可 检测，或将上清置于-20 或-80 保存，但应避免反复冻融。 2、 血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于 1000 g 离心15分钟，取 上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保存，但应避免反复冻融。 3、其它生物标本：请1000 g 离心20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保 存，但应避免反复冻融。 4、 样本处理：血清或血浆标本推荐稀释 100 倍，如：稀释 100 倍，取 10uL 血清或血浆加 入990uL 样品稀释液。标本使用0.02 M 的PBS 稀释（ PH=7.0-7.2）。 注：以上标本均应密封保存，4 保存应小于 1 周，-20 不应超过 1 个月，-80 不应超过2 个月；标本溶血会影响最 检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在 37 溶解；试剂或样品配制时， 均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样 品进行稀释，以使稀释 的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100