低温贮藏南美白对虾特定腐败茵的分离鉴定及腐败.pdf

1—1802／ts．201603012 DOI：10．13995／j．cnki．1 低温贮藏南美白对虾特定腐败茵的分离鉴定及腐败能力分析 谢丽丹，李蕾蕾，王素英+，董世瑞 (天津市食品生物技术重点实验室，天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津，300400) 摘 要 为了分离鉴定南美白对虾在低温贮藏条件下的腐败菌并测定其腐败能力的大小，分别在4oC和一18 ℃的低温条件下贮藏南美白对虾，从中分离腐败菌，进行形态学观察和分子生物学鉴定，并将腐败菌接种至灭菌 虾汁中进行分解蛋白质对比试验。结果表明，从南美白对虾中分离得到12株腐败菌，分别是Shewanellahafnien— sis，Acinetobacterjohnsonii，Planoccoccuscitreus，Bacilluscereus，Acinetobacter hormaechei，Ar- beijerinckii，Enterobacter throbacter bergeri和Bacilluslicheniformis，其中x1与X10可能为潜在新种或新属。南美白对虾优势腐败菌致腐能 la citreus，Acineto— hafniensis和Acinetobacterbeijerinckii；冻藏条件下致腐能力强的优势腐败菌依次是Planoccoccus bacter johnsonii，Shewanellahafniensis，Acinetobacterbeijerinckii和x1。 关键词 南美白对虾；低温贮藏；优势腐败菌；分离鉴定；腐败能力 众所周知鲜度是评判虾类水产品品质的最重要 鲜活南美白对虾，购白天津市南开区王顶堤水产 指标，没有进行任何保鲜处理的鲜虾，由于营养丰富、 批发市场，立即包装保活运输至实验室； 含水量高，极易被微生物污染而导致腐败变质。人们 用于PCR扩增的全部试剂及扩增引物均从生工 将生存能力强、繁殖快，且产生腐败臭味代谢产物的 生物工程(上海)股份有限公司购买与合成；其它生 特定菌群称为优势腐败菌。相关研究表明，随着贮藏 物试剂购自北京奥博星生物技术有限公司。 时间的增加，优势腐败菌在菌落总数中的比例不断增 加¨j。因此找出新鲜水产品的优势腐败菌对控制其 品质具有重要意义。 D型振荡培养箱，上海博迅实业有限公司医疗设备 南美白对虾是当今养殖产量最高的三大虾类之 一旧1，因此在集中捕捞季节，常采用短期冷藏、长期 系统，北京君意东方电泳设备有限公司。 冻藏的措施以实现销售的时空调节。温度是影响南 1．2实验方法 美白对虾货架期的关键因素¨‘51，但缺乏关于低温条 1．2．1 腐败菌的分离纯化及计数 件下造成南美自对虾腐败的细菌菌相构成、变化规律 用碎冰使鲜活南美自对虾休克，用清水洗净后沥 及腐败能力的系统报道。本文拟对冷藏和冻藏南美 干，随机分成2组，分别冷藏和冻藏，其中冷藏温度为 白对虾的主要腐败菌进行分离纯化，采用形态学特 40C，冻藏温度为一18％。定时取样采用有氧平板划 征、生理生化试验以及16SrRNA序列相结合的方线法∞o进行腐败菌的分离纯化和计数。 法，对优势腐败菌进行鉴定，在此基础上测定其腐败 1．2．2腐败菌鉴定 能力，为延长南美白对虾的货架期，制定针对性较强 肉眼观察菌落形态，革兰氏染色后镜检记录菌体 的保鲜方案提供依据。 的大小、形态、芽孢的有无。在此基础上采用酚／氯仿 抽提法提取腐败菌基因组DNA¨。9。，利用通用引物 1 材料与方法 27F