毛囊细胞特异表达胸腺素β4基因转基因绒山羊研究-动物学专业毕业论文.docxVIP

术。自1997年克隆羊“多莉’’的诞生以来，体细胞克隆技术成为了动物转基因技 术。自1997年克隆羊“多莉’’的诞生以来，体细胞克隆技术成为了动物转基因技 术研究的热点，并在家畜的转基因生产研究中被广泛的应用。本研究采用了体 细胞核移植的转基因方法，即以毛囊特异表达的启动子pKAP6—1引导胸腺素p4 (thymosin beta 4，T134)基因，以新霉素抗性基因和红色荧光蛋白基因作为双 选择标记，构建毛囊细胞中特异性表达T肛的表达载体；利用体外转染技术将 表达载体导入绒山羊胎儿成纤维细胞，通过G4 1 8筛选出稳定表达红色荧光蛋白 的克隆细胞：以体细胞核移植技术制备绒山羊转基因克隆胚胎；并通过胚胎移 植，生产转基因绒山羊。本研究为转基因绒山羊的培育，以及探讨Tp4在绒山 羊毛囊发育和生长周期中的调控作用提供了研究基础。 1．毛囊细胞特异性表达载体的构建 通过PCR和RT．PCR方法分别从绵羊总DNA和绒山羊总RNAq了扩增出角蛋 白关联蛋86．1基因(KAP6．1)启动子区序列和绒山羊胸腺素p4(Tp4)编码区 eDNA序列，以pMDl9T为克隆骨架构建成中间克隆载体p19TKT。将CMV启动 子序列连接在pDsRed2．1表达框架的红色荧光蛋白报告基因(Red2)上游 内蒙古大学 内蒙古大学 硕士学位论文 rpn I+Sma I位点构成pCDsRed2；pCD