吖啶酯标记抗体复合物.PPT

　荧光偏振免疫测定　(fluorescence polarization immunoassay，FPIA)，为一种均相荧光免疫测定方法，其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照射后，可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光，该荧光强度与荧光 标记物质在溶液中旋转的速度呈反比，与分子大小呈正比，常采用抗原-抗体竞争反应原理，适用于小分子半抗原（如药物浓度）的检测。 ?　 二、荧光偏振免疫分析仪 基本原理 抗原抗体竞争反应 AgF分子小，转动速度快，偏振荧光弱 AgF-Ab分子大，转动速度慢，偏振荧光强 若待检抗原多，则AgF-Ab少，AgF多，偏振荧光弱 待检抗原含量与偏振荧光强度成反比 偏振光和偏振荧光发生示意图 荧光偏振免疫测定工作原理示意图 　1. 抗原抗体反应 　2.偏振荧光强度测定 （二） 仪器测定技术要点 　1.FPIA的结果好坏取决于荧光素标记的好坏、激发态荧光的平均寿命、抗原的相对分子量和复合物的特性等因素。 　2.为提高FPIA灵敏度，可用除蛋白剂对标本进行预处理，除去干扰成分。 （三）注意事项 自动化荧光免疫分析的应用 1. 激素：甲状腺激素、甾体类激素 2. 病毒性肝炎标志物 3. 肿瘤相关抗原 4. 小分子药物 5. 多肽类 第四节 自动化酶联免疫分析系统 根据全自动酶联免疫分析系统的处理模式，人们通常将全自动酶免分析仪分成二类，一类为分体机，一类为连体机。分体机是由“前处理系统”即全自动样本处理工作站和“后处理系统”即全自动酶免分析仪两个独立的部分组成。连体机是由多个模块组成，使用一台计算机、一套操作系统实现了从标本稀释、加样到酶标板孵育、洗涤、加试剂、再孵育、洗涤、读数和结果打印全自动进行。 （一）仪器组成和性能 　1.条形码识别系统 　2.样本架和加样系统 　3.试剂架 　4.温育系统 　5.液路系统 　6.洗板系统 　7. 酶标板读数仪 　8.自动装载传递系统 　9. 计算机管理和信息系统 全自动酶免分析仪中的连体机是将样本处理工作站和全自动酶免分析仪联合起来，工作速度快，自动化程度高，适合大批量样本的处理。 分体机，由于它有一个独立的全自动样本处理站，加样速度快，适合试验项目变化多、样本批量不等的临床实验室。 （二）仪器评价 采用流水线式操作 自动化分析的选择与应用 一、选择原则 - 资质 - 性能 - 环境条件 - 检测要求 - 信息要求 - 经济效益 二、临床应用 免疫浊度分析 免疫检验自动化 定时散射比浊法 速率散射比浊法 散射比浊法 透射比浊法 化学发光免疫分析系统 荧光免疫分析系统 自动化酶联免疫分析系统 直接化学发光免疫分析 化学发光酶免疫分析 辣根过氧化物酶 标记的化学发光 碱性磷酸酶 标记的化学发光 电化学发光免疫分析 时间分辨荧光免疫测定 荧光偏振免疫测定 　该仪器采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗原或抗体、以塑料锥形小管为固相载体，鲁米诺为化学发光剂，还利用增强剂使化学发光强度增加、时间延长。 　辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析仪 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入信号试剂A和氧化剂B 信号检测 仪器测定技术要点 辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫测定示意图 碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图 ㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析  碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析仪 该仪器是以碱性磷酸酶标记抗原或抗体，以顺磁性微粒子为固相载体，用AMPPD作为化学发光剂进行测定的自动化仪器。 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入AMPPD发光剂 信号检测 仪器测定技术要点 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫测定示意图 化学发光酶免疫分析方法学评价 测定过程与ELISA相似，仅最后一步酶反应的底物改为发光剂和测定的仪器为光信号检测仪 酶标记抗原或抗体结合稳定 酶催化鲁米诺、AMPPD等发光剂发出的光稳定，持续时间长，便于记录和测定 （三）碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪 该仪器以碱性磷酸酶标记抗原或抗体，以塑料微粒为固相载体包被抗体（或抗原），以4-甲基伞型酮磷酸盐（4-MUP）作为酶促反应的荧光基质（底物），底物被酶水解后，脱磷酸根基团，形成4-甲基伞型酮(4-MU)，用360nm激发光照射，发出450nm的荧光。 4-甲基伞型酮磷酸盐（4-MUP）反应原理示意图 仪器测定技术要点 抗原抗体结合 洗涤、分离 加入底物4-MUP 信号检测 碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫测定示意图 电化学发光免疫分析（ECLIA）是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。电化学发光免疫分析仪是采用电化学发光技术，生物素放