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美国药典微生物检测精要 培训小结 一 微生物实验室规范 重要的控制点：无菌技术、培养基控制、菌种控制、设备操作与控制、数据记录与实验室布局和运作、员工培训等。 无菌技术：防止和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作方法和管理方法。可通过无菌环境、灭菌、消毒、卫生要求、无菌操作技术等手段来实现。 培养基：是微生物实验工作的核心。包括培养基制备、培养基储存、培养基质量控制。 培养基制备 根据既定的目的选用正确的培养基 参考生产商的ＣＯＡ和说明书：关于配制、储存和菌种选用等。 所用的水应为去离子水或蒸馏水，应记录用量。 成分的称量应用校准过的天平，根据称量量的不同选择合适的天平。使用清洁的容器和工具（1051玻璃器皿清洁）以防外来污染和抑制剂。应记录称量量。 加热帮助溶解时应防止过度加热，通常培养基颜色变深说明加热过度了。 灭菌条件： 灭菌参数应验证，验证应同时考虑无菌和培养基生长能力 采用高压蒸汽灭菌或过滤灭菌。湿热灭菌应考虑装载分布，加热速度过慢会使培养基过度加热，通常为121℃ 15min，此时间是指培养基温度达到121 保证最低SAL，在无菌和过度加热之间平衡。 与污染物分开灭菌 消毒结束后，不应在灭菌柜中储存培养基，过度加热会影响培养基颜色、澄清、pH和凝固能力。 培养基储存 制备培养基的储存 琼脂培养基易受冷冻影响，低于0℃ 应避光避热，密封防止水分蒸发（建议使用螺旋盖的瓶子密封，保存时间长）。 培养基融化 不能超过一次，以防过度加热或潜在污染。 融化可采用水浴、流通蒸汽或微波炉加热。微波炉加热宜采用少量多次，以防过度。 培养基融化后在40-50℃ 培养基标示 培养基名称 批号、制备批号 制备日期、有效期 有效期确定 根据成分、配方、容器、储存条件等确定 有生长能力试验数据支持 应在验证过的条件下储存 重要区域环控用培养基必须 双层包装 最终灭菌，否则进行全数培养及用前检查 根据当地生物危险品安全程序处置过期培养基 培养基质控 灭菌后培养基检查 生长能力 每批制备的培养基均需进行 测试菌种根据药典，供应商说明书及环境中分离得到 测试不合格应进行调查，如无原因，或无有效纠正措施，不得使用该批号 无菌 pH 容器/平皿的完整性 抑制或指示能力 定期稳定性检查以确认储存有效期 菌种保藏 建立标准程序处理、保存菌种，防止污染和特性变化 使用前确认菌种身份和纯度 根据生产商说明书复苏菌种，使用接种技术 -70℃ 开启后不要重新冷冻菌种，剩余部分应弃置 传代次数（每接种一次即为一代）不超过5次 保藏时间根据具体保藏条件确定 设备维护 定期校准、保养 定期性能检查 定期清洁、消毒 实验室布局和运作 防止交叉污染 活动分区：无菌、环控样品的处理和培养应在无菌环境中进行 当发现微生物生长，后续的工作应转移至“阳性”区 环控设备应放置在待取样区域环境中并小心操作 应在受控条件下小心取样 样品处理 大部分样品、水或环控样品中的微生物对操作、储存环境敏感 减少样品，取样与测试间的时间间隔 长时间的转移需确认转移条件对测试及样品的影响 在无菌条件下，使用无菌技术取样，即使是非无菌样品 取样记录：样品信息、取样日期、送样日期、人员/部门、实验室样品接受及确认 培养基培养时间 短于3天，用小时表示 长于3天，用天表示（上午、下午，相同时间段） 人员培训 每个岗位应有相应培训要求，进行上岗前资质确认 实验室文件 微生物人员培训和能力确认（上岗资质） 设备验证、校准和维护 测试中的设备性能（如温度记录） 培养基制备、无菌检查、生长能力测试、选择性测试 培养基清单与控制 根据程序（ＳＯＰ）进行测试的重要数据 数据和计算的确认 经ＱＡ人员或相应领导审核过的报告 超标结果调查 实验室结果维护 检测报告至少应包括： 日期 测试样品 微生物检验人员名字 程序编号 测试结果 偏差（如有） 测试参数（设备、菌种、培养基） 管理人员审核签名 数据纠错：错误的地方划一横线，签名和日期，必要时说明原因 测试结果 应包含平皿计数结果（如有） 数据分析方法应罗列在相关ＳＯＰ中 对粘贴的图表、数据骑缝签名 存档：记录应存档并防止丢失，应有记录留存计划 测试结果解释 微生物数据有时不容易解释 与人类相关的微生物群落被广泛的用于许多测试 人员污染是始终被关心的问题 样品或环境中的微生物并非均匀分布 微生物检测可变范围大：可能在+/-0.5log10单位左右 不符合的结果可能是由2个原因造成的：实验室错误或产品不符合。无论哪种情况，管理层必须立即被通知 调查应包括： 数据偏离的程度（严重性） 平行数据间差异的评估 实验室环境 取样方法 物料特性（存活的污染微生物） 人员面谈 留样评估 测试过程 纠偏计划（警戒限、行动限） 如果发现实验室错误，需要 纠偏措施的有效性需要跟踪和记录 无效测